HBV preS1融合蛋白的表達(dá)研究.pdf

1、目前，乙型肝炎病毒感染是全球性公共衛(wèi)生問題。近年來國內(nèi)外有研究表明HBVpreSl是HBV與肝細(xì)胞的結(jié)合區(qū)，HBV preS1(前S1)5’端的短肽作為導(dǎo)向工具對于控制慢性乙型肝炎的蔓延有著潛在的意義。 目的：通過表達(dá)preS1片段與綠色熒光蛋白EGFP和preS1片段與干擾素的融合蛋白，研究preS1融合蛋白在原核和真核細(xì)胞中的表達(dá)效果，探討preS1片段與干擾素融合作為肝細(xì)胞特異性導(dǎo)向藥物的可行性。 方法：首先根據(jù)H

2、BV(adw2亞型)preS1核苷酸序列，設(shè)計引物，用含HBV(adw2亞型)全長基因的質(zhì)粒為模板，分別擴(kuò)增HBV的preS1(a.a.2-48)、preS1(a.a.2l-48)的編碼序列。將擴(kuò)增后獲得的preS1兩個短肽的編碼序列分別與EGFP和干擾素融合，克隆到原核表達(dá)載體以及真核表達(dá)載體上，以期獲得高水平表達(dá)。觀察preSl(a.a.2-48；21-48)-EGFP轉(zhuǎn)染人肝癌細(xì)胞系HepG2后熒光蛋白在絀胞各部分(主要是細(xì)胞膜)

3、的分布情況。用ELISA方法和熒光定量PCR方法分析preS1(a.a.2-48；21-48)-IFN轉(zhuǎn)染HepG2.2.15細(xì)胞后對HBV分泌的抑制作用。采用Wish細(xì)胞-VSV病毒檢測系統(tǒng)對preSl(a.a.2-48；21-48)-IFN進(jìn)行生物學(xué)活性的檢測。 結(jié)果：通過蛋白電泳分析表明， HBV preSl(a.a.2-48；21-48)-EGFP 和preSl(a.a_2-48；21-48)-IFN在大腸桿菌和酵母中未

4、能檢測到表達(dá)。通過熒光顯微鏡觀察，表明preSl(a.a.2-48；21-48)-EGFP在人肝癌絀胞系HepG2中獲得表達(dá)，preSl(a.a.2-48；21-48)-EGFP在HepG2細(xì)胞中表達(dá)的熒光蛋白主要集中在細(xì)胞質(zhì)中。preSl(a.a.2-48；21-48)-IFN真核表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HepG2.2.15絀胞后對HepG2.2.15分泌HBV有抑制作用。 結(jié)論： HBV preSl(a.a.2-48)、preS1(a.