靶向多功能防栓融合蛋白的表達(dá)研究.pdf

1、LL-37是Cathelicidin蛋白N端的37個(gè)氨基酸，不僅具有廣泛的抗菌、抗病毒活性，還具有調(diào)節(jié)凝血、免疫作用。HV具有良好的抗凝血、抗血栓作用，對(duì)血栓疾病有較好的預(yù)防和治療效果。HV-12-P是具有最大抗凝活性的最小肽段，它與纖維蛋白原競(jìng)爭(zhēng)性地結(jié)合凝血酶，抑制其活性，進(jìn)而阻止纖維蛋白形成，防止血栓形成和發(fā)展。通過對(duì)HV-12-P結(jié)構(gòu)修飾可以延長(zhǎng)半衰期、降低副作用及增加新功能，如RGD融合HV-12-P。
　　長(zhǎng)期以來抗血栓

2、研究局限在溶血、抗凝血機(jī)制與血栓形成的研究，對(duì)于炎癥或者病菌性感染與血栓病理過程的關(guān)系探討較少。炎癥是血栓性疾病的重要組成部分，炎癥反應(yīng)有利于凝血，而血栓形成的過程也能擴(kuò)大炎癥反應(yīng)。本研究結(jié)合LL-37的多功能特性和HV的高抗凝性，將FXa識(shí)別序列融合在LL-37和HV-12-P之間，從而期望獲得既具有LL-37抗炎免疫、清除內(nèi)毒素、調(diào)節(jié)凝血的多功能特性，又具有HV抑制凝血和抗血栓形成的作用。同時(shí)將AAP三肽序列融合在水蛭素12肽C端，

3、接著添加一個(gè)亮氨酸連接RGD肽，以增強(qiáng)抗血小板聚集作用。除外，在目的蛋白N端增加一個(gè)6×HisTag便于蛋白的分離純化，以期為大量生產(chǎn)成為具有抗炎、抗凝活性和保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞的多功能融合蛋白提供有效的基因工程手段。
　　抑菌試驗(yàn)表明LL-37并沒有因?yàn)槌蔀槿诤系鞍捉M分而喪失其活性；血小板聚集測(cè)定結(jié)果說明LHAD具有很好的抗血小板聚集活性；通過測(cè)定抗凝血酶活性和比活性、PT、APPT得出，起初LHAD抗凝血酶活性非常低，隨著FXa酶