柴胡皂甙d干預肺纖維化VEGF-PEDF表達的實驗研究.pdf

1、目的：觀察血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)/色素上皮衍生因子(PEDF)在博來霉素(Neomycin,BLM)誘導的小鼠肺纖維化過程中各時期的表達變化,以及柴胡皂甙d(saikosaponin-dSSd)干預后,對博來霉素致肺纖維化小鼠肺組織血管VEGF/PEDF在不同時期表達變化的調(diào)節(jié)作用,并探討其與抗肺纖維化作用的關(guān)系。
　　 方法：將80只小鼠隨機分為4組(各組n=20),其中3組為BLM誘導肺纖維化模型組(氣管內(nèi)注射BLM5

2、mg/kg),分別為單純模型組(BLM組),SSd大、小劑量組,造模后1h,后兩組分別腹腔內(nèi)注入SSd2.0mg/kg(0.2mL),1.0mg/kg(0.2mL),每天一次,連續(xù)28天,BLM每天注入同體積的生理鹽水,另一組為正常對照組(Cont組),分別于3,7,14,28天各組隨機處死5只小鼠,取肺組織MASSON染色觀察纖維化程度,樣本堿水解法檢測肺組織中羥脯氨酸(HYP)含量,免疫熒光觀察PEDF、VEGF蛋白在肺內(nèi)表達的規(guī)律

3、,RT-PCR觀察各時間點REDF,VEGFmRNA表達的強度。
　　 結(jié)果：(1)MASSON染色模型組、SSd組均呈纖維化逐漸進展的動態(tài)變化,第28天時,纖維化程度評分SSd大、小劑量組纖維化程度均較BLM組輕(P＜0.01),SSd組之間比較無明顯差異;
　　 (2)HYP含量測定模型組、SSd組HYP含量隨時間逐漸增加,到28天達高峰,7、14及28d時SSd大、小劑量組HYP含量也少于BLM組(P＜0.01),

4、第14天及28天,大劑量SSd組HYP含量少于小劑量組(P＜0.05);
　　 (3)免疫熒光結(jié)果模型組、SSd組VEGF在時間上,在纖維化早期(3,7天)分布較多,空間上,在肺纖維化程度較輕的區(qū)域分布較多,在纖維化中后期(14,28天)以及肺纖維程度高的區(qū)域分布較少,PEDF的分布隨著時間推進逐漸增多,尤其在肺纖維化程度高的區(qū)域分布密集;
　　 (4)VEGF/PEDFmRNAPCR結(jié)果各模型組、SSd組VEGFmRN

5、A從第三天開始升高,第7天達高峰,之后逐漸下降,28天到最低,SSd大、小劑量組各時點較BLM組VEGFmRNA水平降低,差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05或P＜0.01),SSd大、小劑量組第7、14天,差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。PEDFmRNA第3,7天表達仍較低,14天開始表達明顯增高,28天達高峰,總體呈現(xiàn)逐漸增高趨勢;SSD治療后,SSd大、小劑量組各時點較BLM組PEDFmRNA表達水平升高,其中第7、14及28天差異

6、均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05或P＜0.01),SSd大、小劑量組于第7、14天差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);
　　 結(jié)論：小鼠肺組織的病理特點及纖維化程度評分說明氣管內(nèi)注射博來霉素建立小鼠肺纖維化模型成功,并可用于肺間質(zhì)纖維化研究。在肺纖維化過程中,VEGF/PEDF比例平衡早期先增大,后期減小的動態(tài)變化,可能在肺纖維化形成過程中起著重要作用;SSd干預后,纖維化程度及HYP含量明顯降低,表明SSd能夠明顯抑制小鼠肺纖維化進