氧化鈹致大鼠肺纖維化的實驗研究.pdf

1、目的：
　　本研究以BeO為染毒物質(zhì)，復(fù)制大鼠肺纖維化動物模型，通過檢測實驗動物染毒Thy-1、TGFβ-smad2/3信號通路蛋白的表達(dá)，探討Thy-1、TGFβ1-smad2/3信號通路在鈹致肺纖維化中的意義，為后續(xù)研究提供依據(jù)。
　　方法：
　　64只SPF級健康雄性SD大鼠，隨機(jī)分為陰性對照組（32只）、BeO染毒組（32只）。氧化鈹組氣管灌注BeO混懸液0.5ml，陰性對照組注入等量的無菌生理鹽水，處死時間為

2、染毒后20、40、60和80 d四個時間點取材，分別進(jìn)行以下實驗：
　　1.取肺組織，制作石蠟切片并進(jìn)行HE、Masso n和免疫組化染色，同時制作電鏡切片。
　　2.實時定量PCR（RT-PCR）法檢測COL-I，COL-III和α-SMA的基因表達(dá)水平。
　　3.蛋白質(zhì)印跡法（western-blot）檢測各組肺組織中COL-I，CLOL-III和α-SMA的蛋白水平。
　　4.取肺組織制備肺組織勻漿，酶聯(lián)免

3、疫法（ELISA）檢測Thy-1、TGFβ1、smad2、smad3、p-smad2、p-smad3的蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1.鼠肺組織解剖學(xué)形態(tài)和病理學(xué)的改變：大體觀察結(jié)果顯示：陰性對照組肺呈粉紅色，光滑質(zhì)軟。BeO染毒后，隨染毒時間延長肺部損傷進(jìn)行性加重，逐漸出現(xiàn)充血、體積增大、局部白色粟粒狀結(jié)節(jié)等，最終可見全肺結(jié)節(jié)及萎縮等。HE染色顯示：BeO染毒后20、40d主要病理改變以炎性細(xì)胞浸潤為主，肺泡隔增厚；染毒后6

4、0、80 d肺泡腔縮小，部分肺泡結(jié)構(gòu)消失和結(jié)構(gòu)紊亂，局部可見纖維化結(jié)節(jié)且可見 BeO粉塵顆粒，局部發(fā)生肺組織實變。Masson染色顯示:BeO染毒后支氣管及肺泡間隔可見藍(lán)色膠原沉積隨著時間的延長藍(lán)色膠原沉積明顯增加。電鏡結(jié)果顯示：BeO染毒20d和40d后呈現(xiàn)肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞胞漿嗜鋨小體排空；60d和80d后肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞胞漿嗜鋨小體嗜鋨小體致密，肺間質(zhì)可見纖維束存在。
　　2.BeO染毒組COL-I mRNA和蛋白表達(dá)升高（P

5、<0.05）；BeO染毒組COL-I mRNA和蛋白隨著時間延長而增加（P<0.05）。BeO染毒60、80 d COL-III mRNA和蛋白表達(dá)水平升高（P<0.05）；BeO染毒組COL-III mRNA和蛋白隨著時間延長而增加（P<0.05）。BeO染毒后a-SMAmRNA表達(dá)升高（P<0.05），BeO染毒組a-SMA蛋白表達(dá)高于同時間點的陰性對照組（P<0.05）；a-SMA mRNA隨著時間延長而增加（P<0.05）。

6、r>　　3.BeO染毒TGFβ1表達(dá)升高（P<0.05），TGFβ1隨著時間延長而增加（P<0.05）。BeO染毒后s mad2、s mad3蛋白水平升高（P<0.05），Smad3表達(dá)隨著時間延長而增加（P<0.05）；BeO染毒p-s mad2、p-smad3表達(dá)升高（P<0.05）并且隨著時間延長而增加。
　　4.BeO染毒后Thy-1表達(dá)降低，隨著時間延長而降低（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　?。?）一次性非