化瘀理肺方干預(yù)大鼠肺纖維化形成的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：1．建立大鼠肺間質(zhì)纖維化模型；2．觀察化瘀理肺方對(duì)大鼠肺纖維化形成的干預(yù)作用；3．探討化瘀理肺方對(duì)大鼠肺間質(zhì)纖維化模型肺組織Smad3和Smad7蛋白表達(dá)的影響；5．對(duì)比化瘀理肺方與氫化可的松瑚珀酸鈉對(duì)大鼠肺間質(zhì)纖維化模型肺組織細(xì)胞形態(tài)學(xué)及肺組織Smad3和Smad7蛋白表達(dá)的差異。 方法：44只雄性Wistar大鼠大鼠隨機(jī)分為4組，分別為模型組(博萊霉素+生理鹽水)、中藥組(博萊霉素+化瘀理肺方)、激素組(博萊霉素+氫化

2、可的松琥珀酸鈉)、對(duì)照組(生理鹽水+生理鹽水)，中藥組14只，其余每組10只。用1﹪戊巴比妥鈉腹腔內(nèi)注射麻醉(35mg/kg)，使大鼠仰臥位固定在鼠板上，固定四肢及頭部，用開口器撬開動(dòng)物口腔，壓迫舌腹，暴露聲門，在額鏡直視下，趁動(dòng)物吸氣的瞬間，迅速將與1ml注射器相連的帶接頭硬脊膜外麻醉導(dǎo)管插入氣管1～2厘米，觀察到導(dǎo)管內(nèi)液柱隨動(dòng)物呼吸而波動(dòng)后，緩慢注入0.4﹪博萊霉素0.25ml(5mg/kg)和0.25ml空氣。注藥后，立即將動(dòng)物直

3、立旋轉(zhuǎn)，使藥物在肺內(nèi)分布均勻。從第二天開始，中藥組每天給予化瘀理肺方藥物灌胃(13410mg/kg)，激素組每天給予氫化可的松琥珀酸鈉腹腔注射(25mg/kg)，對(duì)照組和模型組每天給予生理鹽水(2ml/只)灌胃。給藥過程中觀察動(dòng)物的一般狀況：動(dòng)物活動(dòng)、體型、皮毛、精神狀態(tài)、攝食、糞便等。給藥后第14天和28天每組各處死5只大鼠(中藥組處死7只)，觀察各組雙肺外觀差別，取右肺中葉置于10﹪中性福爾馬林固定，石蠟包埋、切片，HE染色。用組織

4、芯片和免疫組化相結(jié)合的方法檢測肺組織Smad3和Smad7蛋白表達(dá)。 結(jié)果： 1．一般狀況觀察：造模后3天內(nèi)各組表現(xiàn)無明顯異常，活潑好動(dòng)，飲食及大便正常，毛發(fā)光澤。造模后第4天各組動(dòng)物開始不同程度出現(xiàn)飲食、活動(dòng)減少，精神萎靡，毛枯，1周后出現(xiàn)消瘦，以模型組較明顯；激素組開始表現(xiàn)與模型組相似，1周后稍有好轉(zhuǎn)，但消瘦趨勢未見明顯改善；中藥干預(yù)組開始表現(xiàn)與模型組相似，治療1周左右后好轉(zhuǎn)，活潑好動(dòng)，強(qiáng)壯肥碩，精神及食欲好。

5、 2．肺組織大體觀察：正常對(duì)照組大多雙肺外觀無異常，表面光滑、粉紅色、彈性良好；14天有一只大鼠肺葉呈淡紅色，但無結(jié)節(jié)樣改變。模型組第14天雙肺膨大，暗紅色，可見散在點(diǎn)狀出血，局部見大小不等灰白色結(jié)節(jié)樣改變，彈性差；第28天雙肺較前體積縮小，硬度增加。中藥組部分呈暗紅色，偶見大小不等結(jié)節(jié)樣改變、邊緣有點(diǎn)狀出血及部分肺葉體積縮小。激素組與模型組相似，部分肺葉表面光滑，局部見大小不等結(jié)節(jié)樣改變，邊緣有點(diǎn)狀出血，部分肺葉體積縮小，有白色結(jié)節(jié)

6、。 3．肺泡炎、肺纖維化程度比較：對(duì)照組大鼠大多肺結(jié)構(gòu)清晰，觀察各時(shí)間段未出現(xiàn)明顯形態(tài)學(xué)改變，極少數(shù)出現(xiàn)肺泡間隔增寬及少量炎性細(xì)胞浸潤情況。模型組14天肺泡間隔明顯增寬，可見大量炎性細(xì)胞浸潤的改變，伴有成纖維細(xì)胞增多；28天肺泡結(jié)構(gòu)破壞，肺泡間隔增寬及肺間質(zhì)纖維成分增多較前更為明顯，但肺部炎性細(xì)胞浸潤情況較前有所減輕。激素組和中藥組肺泡炎程度同模型組比較均明顯減輕(P<0.05或P<0.01)，且隨著時(shí)間演變有繼續(xù)減輕趨勢；中藥

7、組肺泡炎減輕程度更為明顯，28天時(shí)同對(duì)照組比較已無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。激素組肺纖維化程度與模型組比較有所減輕，但不明顯(P>0.05)，且仍有繼續(xù)加重趨勢；中藥組纖維化程度同模型組比較明顯減輕(P<0.01)，而且肺纖維化發(fā)展有減緩趨勢，其中，28天時(shí)肺纖維化程度同激素組比較也明顯減輕(P<0.05)，但同對(duì)照組比較仍較重(P<0.01)。 4.Smad3和Smad7免疫組化染色結(jié)果：Smad3蛋白在正常對(duì)照組弱表達(dá)；模

8、型組較對(duì)照組表達(dá)明顯增強(qiáng)，呈黃色或棕黃色顆粒，主要定位在炎癥細(xì)胞的胞漿及胞核中；中藥組Smad3蛋白表達(dá)明顯少于模型組和激素組(P<0.01)；激素組Smad3蛋白較模型組也有所減少，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Smad7蛋白在對(duì)照組中大量表達(dá)，主要定位在肺泡上皮細(xì)胞的胞漿中，支氣管上皮細(xì)胞及少量間質(zhì)細(xì)胞的胞漿中也有少量表達(dá)，胞核中偶有表達(dá)。模型組Smad7蛋白表達(dá)明顯少于對(duì)照組(P<0.01)，并且有減少趨勢。激素組Smad7蛋白表達(dá)也顯著少于對(duì)

9、照組(P<0.01)，同模型組比較有所增強(qiáng)，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，而且也有減少的趨勢。中藥組Smad7蛋白表達(dá)與激素組和模型組比較均明顯增強(qiáng)(P<0.01)，并且有升高趨勢，到28天時(shí)已接近正常對(duì)照組水平。 結(jié)論： 1．化瘀理肺方對(duì)BLM致大鼠肺纖維化模型的肺泡炎和肺纖維化有預(yù)防性治療作用； 2．化瘀理肺方可能部分通過調(diào)節(jié)Smad3和Smad7蛋白表達(dá)發(fā)揮抗纖維化作用； 3．氫化可的松瑚珀酸鈉對(duì)