大鼠肺纖維化Cathepsin B的表達及黃芪甲甙的干預.pdf

1、目的：本研究通過檢測博萊霉素致大鼠肺纖維化不同時間點肺組織蛋白酶B (Cathepsin B，CB )的表達，探討CB在肺纖維化形成中的作用機制；通過檢測大鼠肺纖維化時細胞凋亡及CB的動態(tài)變化，探討細胞凋亡和CB變化在肺間質(zhì)纖維化中的意義；通過檢測黃芪甲甙干預的大鼠肺纖維化CB的變化，探討黃芪甲甙對CB的影響，從而闡明黃芪甲甙治療肺間質(zhì)纖維化疾病的作用機制。 方法：清潔級健康Sprague Dawley（SD）大鼠48只，適應性

2、飼養(yǎng)一周后，隨機分為對照組（C 組）；模型組（B 組）；干預組（T 組）。B組按 7天、14天、28天、35天4個時間點分為 4個亞組，即 B7、B14、B28 、B35；T組按7天、14天、28天3個時間點分為T7、T14、T28。每個亞組及 C 組均為 6 只大鼠。模型組和干預組氣管內(nèi)注射博來霉素(BLM，5mg/kg)誘導肺纖維化，對照組在相同條件下給予生理鹽水。第二天起干預組大鼠每天經(jīng)胃管灌服0.1g/L黃芪甲甙2ml，其余兩組

3、相同條件下給予助溶劑羧甲基纖維素鈉。相應時間點處死動物取出肺組織，進行病理學觀察；測定肺組織中羥脯氨酸含量；用免疫組化和RT-PCR觀察各組鼠肺組織CB蛋白及mRNA表達的水平；TUNEL檢測28天各組大鼠肺組織細胞凋亡。 結果： 1、肺組織 HE 染色、Masson 染色：對照組大鼠觀察未見明顯病變。模型組大鼠第 7 天表現(xiàn)為明顯的急性炎癥期，肺泡腔、肺間質(zhì)內(nèi)有大量的多核及單核細胞浸潤，伴有水腫和輕度出血，病變嚴重區(qū)肺

4、泡正常結構被炎性肉芽組織破壞。14 天肺組織炎較前有所減輕，但仍有出血及水腫，成纖維細胞增多，肺間隔明顯增寬，有膠原沉積及斑片狀的纖維化改變； 28 天組，肺組織炎較前略有減輕，肺泡結構破壞，大量膠原沉積在新生的毛細血管周圍，肺泡間隔及部分肺泡腔被膠原和纖維蛋白占據(jù)，間質(zhì)內(nèi)炎性細胞逐漸向以淋巴細胞浸潤為主過渡。模型組、干預組肺組織炎各期均明顯比對照組重，而肺纖維化僅第 14 天和第 28 天與對照組比較差異顯著。干預組與模型組病理變化有

5、同一規(guī)律，但肺組織炎、肺纖維化程度都輕于模型組。說明黃芪甲甙可以減輕肺組織炎和肺纖維化程度。 2.羥脯氨酸（HYP）含量：模型組HYP含量均高于對照組及干預組（P<0.01）, 模型組 HYP 含量隨造模時間的延長逐漸增高，28天達到最高值；干預組 HYP 含量成低水平增高趨勢，HYP 含量均高于對照組而低于模型組（P<0.01或P<0.05）。 3.肺組織細胞凋亡變化：模型組第28天大鼠肺組織中細胞凋亡指數(shù)為(13.7

6、±3.4)％，對照組為(1.9±0.3)％和干預組(5.34±1.54)％，差異有統(tǒng)計學意義(F=79.90,P<0.01)。 4.肺組織CB 和CB mRNA在肺纖維化過程中的表達（SABC 法和RT-PCR）：免疫組化以及RT-PCR結果顯示CB和CB mRNA表達在正常肺組織中表達較弱，在模型組7 d 時表達增強，14d進一步增強，28天達到最高值，35天時較28天開始減弱，但仍強于正常組；干預組CB和CB mRNA表達量

7、成低水平增高趨勢，CB和CB mRNA表達量均高于對照組而低于模型組（P<0.01或P<0.05）。 結論： 1、CB在實驗性大鼠肺纖維化發(fā)病過程中起重要作用，其過度表達可能參與了肺纖維化的發(fā)生發(fā)展過程。 2、博萊霉素致大鼠肺間質(zhì)纖維化時引起肺組織CB表達上調(diào)，啟動肺組織細胞凋亡程序，在肺纖維化發(fā)生、發(fā)展中起到重要的作用。 3、黃芪甲甙可能通過抑制CB的過度表達，對實驗性大鼠肺纖維化具有良好的治療作