阿奇霉素對博來霉素致大鼠肺纖維化的干預(yù)作用及機制.pdf

1、目的：間質(zhì)性肺疾病(interstitial lung disease，ILD)是指肺間質(zhì)損傷而產(chǎn)生的一類疾病，病變涉及肺泡壁和肺泡周圍組織。特發(fā)性間質(zhì)性肺炎(Idiopathic interstitial pneumonia，IIP)在間質(zhì)性肺疾病中占據(jù)重要地位，這是一組原因不明的彌漫性肺疾病。特發(fā)性肺纖維化(Idiopathic pulmonary fibrosis，IPF)是特發(fā)性間質(zhì)性肺炎中的一種，組織病理學(xué)表現(xiàn)為尋常型間質(zhì)性肺

2、炎，一種慢性漸進性發(fā)展的疾病。該類疾病的病理特點表現(xiàn)為炎癥反應(yīng)、成纖維細胞增殖以及細胞外基質(zhì)蛋白沉積。有研究表明，在肺纖維化形成過程中存在著TH1型細胞因子和TH2型細胞因子間的失衡，即TH1/TH2免疫失衡。γ干擾素(INF-Y)屬于TH1型細胞因子，具有抗纖維化的作用，主要通過抑制成纖維細胞增生，抑制膠原沉積，抑制TGF-β的產(chǎn)生與活化，并促進成纖維細胞的降解這幾方面來實現(xiàn)的。白介素4(IL-4)是TH2型細胞因子。IL-4可擴大炎

3、癥反應(yīng)，引起肺結(jié)構(gòu)的重塑，刺激肺成纖維細胞增生，并調(diào)節(jié)成纖維細胞的趨化，增殖，合成膠原，從而膠原和纖維素沉積增多，造成肺泡壁基底膜增厚和彌漫性上皮下纖維化。有研究發(fā)現(xiàn)作為炎癥介質(zhì)的白介素17(IL-17)參與了肺纖維化的發(fā)病。目前IPF的治療方法通常包括皮質(zhì)類固醇激素或聯(lián)合使用一種細胞毒藥物。但是免疫抑制療法的作用有限，并且副作用不容忽視。目前，新的潛在抗纖維化治療都在研究當中，缺乏真正有效治療肺纖維化的方法。國外對阿奇霉素治療肺纖維化

4、做了比較深入的研究，并顯示能夠降低肺纖維化程度的同時改善肺功能。
　　本研究通過應(yīng)用阿奇霉素干預(yù)博來霉素誘導(dǎo)的大鼠肺纖維化進程，檢測其對肺泡灌洗液IL-4、IL-17、INF-γ水平的影響，并與地塞米松作比較，初步探討阿奇霉素抗纖維化的機制及效果。
　　方法：選取清潔級健康、雄性SD大鼠(河北醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供)120只，體重220±10g，適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后，隨機分為：(1)對照組(A組)：30只，氣管內(nèi)注入0.1ml

5、/100g生理鹽水，于假造模后第一天用生理鹽水1ml/100g灌胃，1次/d，分別于7、14、28天各處死10只。(2)模型組(B組)：30只，氣管內(nèi)一次性注入博來霉素A5(5mg/kg)，于造模后第一天用生理鹽水1ml/100g灌胃，1次/d，分別于7、14、28天各處死9只、9只、8只。(3)阿奇霉素組(C組)：30只，氣管內(nèi)一次性注入博來霉素A5(5mg/kg)，于造模后第一天用阿奇霉素溶液(阿奇霉素與生理鹽水配成25％溶液)5m

6、g/kg灌胃，1次/d，分別于7、14、28天各處死9只、10只、10只。(4)地塞米松組(D組)30只，氣管內(nèi)一次性注入博來霉素A5(5mg/kg)，于造模后第一天用地塞米松溶液腹腔注射(3mg/kg)，1次/d，分別于7、14、28天各處死10只、10只、9只。各組剪斷右側(cè)股動脈放血處死，處死后即刻行肺泡灌洗并收集肺泡灌洗液，用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)法測定肺泡灌洗液中IL-4、IL-17、INF-γ的含量。通過HE染色、Ma

7、sson膠原染色來評價肺泡炎和肺纖維化的程度，并按照Szapiel法分為4級。右肺上葉制成勻漿測定肺組織中羥脯氨酸濃度。采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件處理數(shù)據(jù)。
　　結(jié)果：
　　1肺組織病理分析結(jié)果：在相同時間點，B組大鼠肺泡炎程度及纖維化程度均顯著高于A組，7天，14天，28天時(P<0.01)，表明動物模型復(fù)制成功。在相同時間點，C組與D組比較，肺泡炎及纖維化程度均顯著減輕，7天，14天，28天時(P<0.01)。在相同時

8、間點，D組與B組比較，肺泡炎及纖維化程度均顯著減輕，7天，14天，28天(P<0.01)。C組與D組肺泡炎及纖維化程度相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　2肺組織羥脯氨酸(HYP)含量變化：B組大鼠肺組織HYP含量隨造模時間延長逐漸升高，至28天達高峰，與A組相比各時間點HYP含量的差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。C組與D組大鼠HYP含量均呈低水平升高趨勢，造模后7、14、28天HYP含量均顯著低于B組(P<0.01)。C組與D組大

9、鼠HYP含量相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　3肺泡灌洗液INF-γ含量變化：各組大鼠肺泡灌洗液中INF-γ表達量在三個時間點比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　4肺泡灌洗液IL-4、IL-17含量變化：B組大鼠肺泡灌洗液中IL-4、IL-17表達量于7、14、28天均高于A組、C組、D組，且各時間點比較均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，A組、C組、D組肺泡灌洗液中IL-4、IL-17表達量比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)論：

10、　　1阿奇霉素在博萊霉素誘導(dǎo)的大鼠肺纖維化模型中，能夠減少肺間質(zhì)的膠原沉積，具有與地塞米松相似的抗纖維化作用，且不良反應(yīng)少。
　　2大鼠肺纖維化模型組存在TH1細胞因子IL-4與TH2細胞因子INF-γ之間的不平衡，阿奇霉素能夠一定程度糾正這種不平衡，從而減輕早期的炎癥反應(yīng)，降低晚期的纖維化改變，這可能是阿奇霉素對抗肺纖維化作用的潛在機制。
　　3大鼠肺纖維化模型組存在TH17型細胞因子IL-17顯著升高，提示TH17細胞可