還原型谷胱甘肽對(duì)博萊霉素致大鼠肺纖維化的干預(yù)作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的：肺間質(zhì)纖維化（pumlonary interstitial fibrosis）是一種慢性炎癥間質(zhì)性肺病，以肺泡巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞在末端肺泡聚集，實(shí)質(zhì)細(xì)胞損傷、肺泡纖維化為特征。其病因及發(fā)病機(jī)理尚不清楚，5年生存率不超過50％，目前尚無特效的治療方法。因此進(jìn)一步研究其發(fā)病機(jī)制、尋找有效的治療方法，已成為許多國(guó)內(nèi)外研究的熱點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)旨在觀察還原型谷胱甘肽對(duì)博萊霉素致大鼠肺纖維化的干預(yù)作用，并與傳統(tǒng)藥物糖皮質(zhì)激素進(jìn)行對(duì)照。通

2、過測(cè)量肺組織內(nèi)還原型谷胱甘肽（GSH）含量、羥脯氨酸（HYP）膠原沉積水平及轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1（TGF-β1）水平探討可能的作用機(jī)制。觀察不同劑量谷胱甘肽對(duì)博萊霉素致大鼠肺纖維化的抗氧化作用效果。
　　 方法：選取清潔級(jí)健康、雄性SD大鼠（河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供）90只，體重220±10g，適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后，隨機(jī)分為：（1）正常對(duì)照組（N組）：18只，氣管內(nèi)注入1ml左右生理鹽水，于假造模后第一日用生理鹽水腹腔注射，1次/日

3、，分別于7、14、28天處死6只。（2）模型組（A組）：18只，氣管內(nèi)一次性注入博萊霉素A5（5mg/kg），于造模后第一日用生理鹽水腹腔注射，1次/目，分別于7、14、28天處死6只。（3）地塞米松組（B組）：18只，氣管內(nèi)一次性注入博萊霉素A5（5mg/kg），于造模后第一日用地塞米松0.5mg/kg腹腔注射，1次/日，分別于7、14、28天處死6只。（4）谷胱甘肽小劑量組（C組）：18只，氣管內(nèi)一次性注入博萊霉素A5（5mg/kg

4、），于造模后第一日用谷胱甘肽100mg/kg腹腔注射，1次/日，分別于7、14、28天處死6只。（5）谷胱甘肽大劑量組（D組）：18只，氣管內(nèi)一次性注入博萊霉素A5（5mg/kg），于造模后第一日用谷胱甘肽400mg/kg腹腔注射，1次/日，分別于7、14、28天處死6只。各組處死前穿刺腹主動(dòng)脈做動(dòng)脈血?dú)夥治?。剪斷腹主?dòng)、靜脈放血處死。用免疫組化方法檢測(cè)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1（TGF-β1），并用圖像分析系統(tǒng)半定量測(cè)定TGF-β1的陽性面積比

5、，右肺下葉制成勻漿測(cè)定肺組織GSH及HYP，通過蘇木精.伊紅染色（HE染色）、Masson膠原染色及測(cè)定肺組織勻漿HYP濃度來評(píng)價(jià)治療效果，肺泡炎及肺纖維化程度按照Szapiel法分為4級(jí)（1分：無肺泡炎或無纖維化；4分：重度肺泡炎或纖維化，受累面積>50％、）
　　 結(jié)果：
　　 1肺組織病理分析結(jié)果：模型組各時(shí)間點(diǎn)肺泡炎程度顯著高于正常對(duì)照組（P<0.05），模型組14天、28天肺纖維化程度顯著高于正常對(duì)照組（P<0

6、.05），表明動(dòng)物模型復(fù)制成功。激素組和谷胱甘肽小劑量組肺泡炎及纖維化程度較模型組減輕，7天組比較：激素組、谷胱甘肽小劑量組肺泡炎程度較模型組顯著減輕（P<0.05），14天比較：激素組、谷胱甘肽小劑量組肺泡炎程度較模型組顯著減輕（P<0.05），28天比較：激素組、谷胱甘肽小劑量組纖維化程度較模型組顯著減輕（P<0.05），但其兩者間無顯著差異（P>0.05）。谷胱甘肽大劑量組各時(shí)間點(diǎn)肺泡炎及肺纖維化程度較激素組減輕，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（

7、P>0.05）。
　　 2動(dòng)脈血?dú)夥治鼋Y(jié)果：模型組于第7天，出現(xiàn)明顯低氧血癥，CO2分壓升高，呈現(xiàn)呼吸性酸中毒表現(xiàn)，至14天逐漸好轉(zhuǎn)，但仍然是氧分壓較低、CO2分壓較高，與對(duì)照組比較差異顯著（P<0.05），到28天后血?dú)夥治鼋Y(jié)果與對(duì)照組無明顯差異（P>0.05），表明第7天和第14天是衡量動(dòng)脈血?dú)獠町愖罴褧r(shí)間點(diǎn)。治療組在7、14天2個(gè)時(shí)間點(diǎn)與模型組比較差異顯著（P<0.05），其中激素組和谷胱甘肽小劑量組之間無明顯差異（P>0

8、.05），谷胱甘肽大劑量組與激素組比較差異明顯（P<0.05）。
　　 3肺組織谷胱甘肽（GSH）含量變化：7天時(shí)模型組肺組織GSH量比正常低，與對(duì)照組有顯著性差異（P<0.01）；地塞米松組和谷胱甘肽小劑量組7天肺組織GSH較7天模型組升高，有顯著性差異，但兩者之間無明顯差異（P>0.05）；谷胱甘肽大劑量組比模型組、激素組顯著增高（P<0.05）。14、28天時(shí)模型組GSH值仍低于正常，但無顯著性差異（P>0.05、）。

9、r>　　 4肺組織羥脯氨酸（HYP）含量變化：博萊霉素模型組大鼠肺組織羥脯氨酸含量隨造模時(shí)間延長(zhǎng)逐漸升高，7天時(shí)明顯高于正常對(duì)照組（P<0.01），至28天達(dá)高峰。治療組大鼠羥脯氨酸呈低水平升高趨勢(shì)，升高速度顯著減慢，造模后7、14、28天羥脯氨酸含量均顯著低于博萊霉素模型組（P<0.01）。谷胱甘肽小劑量組與地塞米松組各時(shí)間點(diǎn)羥脯氨酸含量均低于博萊霉素模型組（P<0.01.），但兩組比較差異無顯著性意義（P>0.01）。造模后第28

10、天谷胱甘肽大劑量組的羥脯氨酸含量顯著低于博萊霉素模型組，有顯著性意義（P<0.01）。
　　 5大鼠肺組織TGF-β1蛋白表達(dá)：模型組大鼠TGF-β1表達(dá)量7、14、28天均高于正常對(duì)照組、治療組，三個(gè)時(shí)間點(diǎn)比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。谷胱甘肽小劑量組與地塞米松組各時(shí)間點(diǎn)TGF-β1表達(dá)量7、14、28天均明顯低于模型組，但兩組比較差異無顯著性意義（P>0.01）。谷胱甘肽大劑量組各時(shí)間點(diǎn)TGF-β1表達(dá)量均明顯低于地塞

11、米松組，差異有顯著性（P<0.01）。正常對(duì)照組的少數(shù)支氣管粘膜上皮細(xì)胞的胞漿可發(fā)現(xiàn)少量 TGF-β1蛋白弱表達(dá)，也可偶見 FGF-β1蛋白弱陽性的肺泡巨噬細(xì)胞。
　　 結(jié)論：
　　 1谷胱甘肽早期應(yīng)用可以預(yù)防肺纖維化的發(fā)生進(jìn)展，減少博萊霉素誘發(fā)的肺纖維化的間質(zhì)膠原沉積，提高肺內(nèi)的GSH水平。
　　 2大鼠400mg/kg的谷胱甘肽量不會(huì)導(dǎo)致谷胱甘肽過量引起的氧化應(yīng)激。
　　 3谷胱甘肽治療肺纖維化的機(jī)理