吸入激素和抗bFGF抗體對(duì)大鼠肺纖維化的干預(yù)及bFGF表達(dá)的影響.pdf

1、目的：1 研究吸入糖皮質(zhì)激素對(duì)博萊霉素誘導(dǎo)的大鼠肺纖維化模型的干預(yù)作用及可能的機(jī)制。2探索抗bFGF中和抗體對(duì)肺纖維化的治療機(jī)制是否與抑制bFGF的表達(dá)有關(guān)，開辟治療肺纖維化的新途徑。 方法：雌性Wistar大鼠50只，體重180～250 g，按照隨機(jī)數(shù)字表法將大鼠隨機(jī)分為5組，每組10只：(1)對(duì)照組(C組)；(2)模型組(M組)；(3)布地奈德組(P組)；(4)地塞米松組(D組)；(5)抗bFGF抗體組(K組)。以鹽酸氯胺酮

2、(100mg/kg體重，0.1g/支)腹腔內(nèi)注射麻醉大鼠后，M組、P組、D組、K組給大鼠氣管內(nèi)注入博萊霉素(5mg/kg體重，8mg/支)復(fù)制肺纖維化模型，C組氣管內(nèi)注入同等劑量的生理鹽水作對(duì)照，P組于次日給予霧化吸入等效劑量布地奈德(0.5 mg/kg體重，1mg/2ml/支)，D組于次日腹腔內(nèi)注射地塞米松(0.45mg/kg體重，相當(dāng)于人5 mg/70kg體重，5mg/支)，K組于造模后1，2，3，8，12，19，25天腹腔內(nèi)注射抗

3、bFGF抗體(0.3ml/kg體重，0.5ml/支，效價(jià)1:12500)。上述各組均于注藥后第1周、第4周各宰殺5只。通過蘇木素-伊紅染色觀察肺泡炎、Masson膠原三色染色觀察肺纖維化，用免疫組化及酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)法檢測(cè)bFGF蛋白在大鼠肺組織，血清及肺泡灌洗液(BALE)的表達(dá)。 結(jié)果： 第一部分：1 肺系數(shù)變化(表1)：1周時(shí)M組(13.3±1.7)、P組(14.0±2.1)及D組(12.1±2.8)

4、的肺系數(shù)均高于C組(9.6±1.7)(P＜0.05)：4周時(shí)M組(14.2±1.8)、D組(14.2±1.8)高于C組(9.7±1.5)(P＜0.05) ，P組(10.8±1.9)低于M組(14.2±1.8)(P＜0.05)。 2.肺組織病理學(xué)改變：1周C組的肺組織結(jié)構(gòu)正常(圖1、11)，M組(圖2、12)的表現(xiàn)為肺泡炎及肺間質(zhì)炎癥，P組、D組肺泡炎較前者減輕(圖3、4、13、14)。4周時(shí)C組(圖6)的肺組織結(jié)構(gòu)正常，M組(圖

5、7、16)肺泡結(jié)構(gòu)破壞，間質(zhì)纖維組織增生，形成廣泛性纖維化，但仍有肺泡炎存在，P組、D組的肺纖維化程度較M組減輕(圖8、9、1 7、18)。 3.各組大鼠PaO2變化：1周時(shí)M組(61.5±20.7)、P組(62.6±20.7)、D組(69.1±16.3)PaO2均低于C組(96.8±13.8)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。4周時(shí)M組(57.5±13.6)PaO2低于C組(97.0±10.3)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.0

6、5)；P組(75.6±1 1.6)、D組(75.3±25.1)PaO2與C組(97.0±10.3)比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。 4 各組大鼠肺組織免疫組化bFGF的變化：1周時(shí)M組(0.276±0.017)的bFGF表達(dá)高于C組(0.167±0.031)、P組(0.203±0.062)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，D組(0.230±0.036)的bFGF表達(dá)高于C組(0.167±0.03 1)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

7、(P＜0.05)，P組的bFGF表達(dá)與C組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；4周時(shí)M組(0.294±0.0027) bFGF表達(dá)高于C組(0.155±0.016)、P組(0.192±0.407)、D組(0.202±0.028)組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；P組、D組的bFGF表達(dá)與C組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。 5 各組大鼠血清及BALF中的bFGF的變化：血清中bFGF的表達(dá)： 1周時(shí)M組(0.45

8、7±0.034)的bFGF表達(dá)高于C組(0.182±0.014)、P組(0.303±0.130)、D組(0.206±0.014)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，P組(0.303±0.130)的bFGF表達(dá)與C組(0.1 82±0.014)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，D組(0.206±0.014)與C組(0.1 82±0.014)比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；4周時(shí)M組(0.368±0.032)的bFGF表達(dá)高于

9、C組(0.170±0.115)、P組(0.215±0.027)、D組(0.240±0.081)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)； P組(0.215±0.027)、D組(0.240±0.081)的bFGF表達(dá)與C組(0.170±0.1 15)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01，P＜0.05)。BALF中bFGF的表達(dá)：1周時(shí)BALF中的bFGF在各組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。4周時(shí)M組(0.799±0.013)的bFGF表達(dá)

10、高于C組(0.711±0.039)、P組(0.735±0.01 1)、D組(0.731±0.007)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)； P組(0.735±0.01 1)、D組(0.731±0.007)的bFGF表達(dá)與C組(0.71 1±0.039)比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。 第二部分：1 肺系數(shù)變化：1周時(shí)M組(13.3±1.7)、K組(12.3±2.7)肺系數(shù)均高于C組(9.6±1.7)(P＜0.05)；4周時(shí)

11、M組(4.2±0.8)、K組(2.7±0.8)高于C組(1.0±0.0)(P＜0.05)，K組(2.7±0.8)低于M組(4.2±0.8)(P＜0.05)。 2.肺組織病理學(xué)改變：1周時(shí)C組(1.2±0.4) (圖1、11)肺組織結(jié)構(gòu)正常，M組(3.6±0.5)(圖2、12)表現(xiàn)為肺泡炎及肺間質(zhì)炎癥，K組(2.8±0.9) (圖5、15)肺泡炎較M組(3.6±0.5)減輕。4N時(shí)M組(14.2±1.8)(圖7、16)肺泡結(jié)構(gòu)破壞

12、，間質(zhì)纖維組織增生，形成廣泛性纖維化，但仍有肺泡炎存在；K組(11.8±1.7)(圖10、19)肺組織結(jié)構(gòu)部分破壞，肺泡腔有少量炎細(xì)胞滲出，肺泡間隔輕度增厚，間質(zhì)纖維組織增生不明顯，無明顯纖維化改變。 3 各組大鼠PaO2變化：1周時(shí)M組(61.5±20.7)、K組(64.3±13.7)的PaO2均低于C組(96.8±13.8)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。4周時(shí)M組(57.5±13.6)PaO2低于C組(97.0±10.3)，差

13、異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；K組(76.8±12.6)的PaO2與C組(97.0±10.3)比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。 4 各組大鼠的肺組織免疫組化bFGF的變化：1周時(shí)M組(0.276±0.017)的bFGF表達(dá)高于C組(0.167±0.031)，K組(0.203±0.051)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，K組(0.203±0.051)的bFGF表達(dá)與C組(0.167±0.031)比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

14、(P＞0.05)。4周時(shí)M組(0.294±0.027)的bFGF表達(dá)高于C組(0.155±0.016)，K組(0.205±0.052)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；K組(0.205±0.052)的bFGF表達(dá)與C組(0.155±0.016)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。 5 各組大鼠血清及BALF中的bFGF的變化：血清中bFGF的表達(dá)： 1周時(shí)M組(0.457±0.034)的bFGF表達(dá)高于C組(0.182±0

15、.014)、K組(0.265±0.167)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01，P＜0.05)，K組(0.265±0.167)與C組(0.182±0.014)比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；4周時(shí)M組(0.368±0.032)的bFGF表達(dá)高于C組(0.170±0.115)、K組(0.174±0.012)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，K組(0.174±0.012)與C組(0.170±0.115)比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.

16、05)。BALF中bFGF的表達(dá)： 1周時(shí)BALF中M組(0.655±0.039)NbFGF表達(dá)高于K組(0.2040.030)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，與C組(0.71 1±0.039)比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；4周時(shí)M組(0.799±0.013)的bFGF表達(dá)高于C組(0.711±0.039)、K組(0.169±0.031)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，K組(0.169±0.031)的bFGF表達(dá)與C組