2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、本實(shí)驗(yàn)室體內(nèi)研究曾表明,馬尾松硫酸酯化多糖(SPPM60)能抑制 HepG2細(xì)胞增殖,并誘導(dǎo) HepG2細(xì)胞分化,逆轉(zhuǎn)其惡性,而 PPM60無明顯作用。本次實(shí)驗(yàn)擬以人白血病細(xì)胞株 K562細(xì)胞為研究對(duì)象,考察 PPM60或 SPPM60對(duì)其生長狀態(tài)的影響并對(duì)其機(jī)理進(jìn)行初步探討,以期為馬尾松花粉多糖的開發(fā)利用提供理論支持,并為白血病的防治提供一種潛在的方法。實(shí)驗(yàn)主要分為以下幾個(gè)部分:
  一、PPM60的分離純化及硫酸酯化修飾:采用

2、氯磺酸-吡啶法分別對(duì)50mg PPM60-A、PPM60-B、PPM60-C、PPM60-D進(jìn)行硫酸酯化改性,得到暗黃色產(chǎn)物SPPM60-A、SPPM60-B、SPPM60-C、SPPM60-D61.8mg、79.0mg、63.2mg、71.9mg。用氯化鋇-明膠比濁法鑒定其硫酸根含量并計(jì)算取代度分別為1.28、1.63、1.31、1.49。
  二、PPM60硫酸酯化前后對(duì)K562細(xì)胞增殖能力及細(xì)胞周期的影響:MTT法檢測發(fā)現(xiàn)P

3、PM60對(duì)K562細(xì)胞的增殖的抑制作用明顯強(qiáng)于SPPM60,400μg/mLPPM60或 SPPM60作用K562細(xì)胞48h時(shí)抑制率分別約達(dá)到32%和16%。瑞氏染色、Ho。33342/PI熒光雙染觀察 PPM60或 SPPM60對(duì)K562細(xì)胞形態(tài)的影響。經(jīng)400μg/mLPPM60作用48h后,細(xì)胞體積縮小,核直徑減小,核染色質(zhì)濃縮,胞質(zhì)豐富,核漿比例降低,細(xì)胞膜完整但不光滑,并出現(xiàn)一定程度的凋亡;SPPM60組與對(duì)照組相比沒有明顯差

4、別。流式細(xì)胞技術(shù)檢測PPM60或 SPPM60處理前后 K562細(xì)胞周期分布的變化。PPM60組較對(duì)照組G0/G1期細(xì)胞比例顯著性增加,細(xì)胞周期發(fā)生了G0/G1期阻滯,并誘導(dǎo)凋亡發(fā)生。SPPM60處理組細(xì)胞細(xì)胞周期各個(gè)時(shí)相以及凋亡率與對(duì)照組相比,均沒有顯著性差異。
  三、PPM60硫酸酯化前后對(duì)K562細(xì)胞[Ca2+]i和活性氧的影響:分別以Fura-2/AM和DCFH/DA為探針,熒光分光光度計(jì)檢測 PPM60或 SPPM60

5、處理前后[Ca2+]i和胞內(nèi) ROS的變化。PPM60作用24h、48h、72h后,PPM60組[Ca2+]i與對(duì)照組相比均明顯上升,SPPM60組[Ca2+]i與對(duì)照組各時(shí)間點(diǎn)均顯著性降低;PPM60組胞內(nèi) ROS水平明顯升高,SPPM60組胞內(nèi) ROS水平與對(duì)照組相比基本沒有變化。黃嘌呤氧化酶法測定超氧化物歧化酶(SOD)活力法檢測 PPM60或 SPPM60處理前后胞內(nèi) SOD水平的變化。72h內(nèi) K562細(xì)胞 PPM60作用組的

6、SOD活力較對(duì)照組有下降趨勢;而 SPPM60組胞內(nèi) SOD活力與對(duì)照組相比,基本沒有變化。TBA法檢測 PPM60或 SPPM60處理前后胞內(nèi)丙二醛(MDA)水平的變化。12h、24h、48h、72h后,PPM60組細(xì)胞內(nèi) MDA與對(duì)照組相比都有所增加,SPPM60組胞內(nèi) MDA水平高于對(duì)照組,但幅度甚小。
  以上結(jié)果表明:(1)PPM60對(duì)K562細(xì)胞有較強(qiáng)的抑制作用,硫酸酯化修飾之后降低了其抑制作用。(2)PPM60抑制

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