G-CSF克服骨髓基質細胞對白血病細胞的保護作用.pdf

1、上海交通大學醫(yī)學院碩士學位論文1上海交通大學醫(yī)學院碩士學位論文GCSF克服骨髓基質細胞對白血病細胞的保護作用關鍵詞GCSF，miR146a，CXCR4，Smad4，骨髓微環(huán)境，化療敏感性研究生姓名李昕學號1137219304學科專業(yè)內科（血液病學）指導教師鐘華導師小組成員陳芳源主任醫(yī)師鐘濟華主任技師沈莉菁副主任醫(yī)師徐嵐主治醫(yī)師萬海霞博士研究方向惡性血液病的治療及表觀遺傳調控資助基金項目國家自然科學基金（編號：81270626）上海市自然

2、科學基金（編號：13ZR1425000）申請學位類別碩士學位培養(yǎng)單位上海交通大學醫(yī)學院附屬仁濟醫(yī)院答辯日期2016年4月21日上海交通大學醫(yī)學院碩士學位論文3GCSF打破骨髓基質細胞對白血病細胞的保護作用摘要研究目的以人急性髓系白血病HL60、THP1細胞株為研究對象構建白血病體外研究的模型，旨在研究GCSF如何通過調控miR146aCXCR4和miR146aSmad4信號通路影響處于骨髓微環(huán)境保護中的白血病細胞增殖活性，細胞周期及趨化

3、能力等細胞生物學行為，闡釋GCSF增強化療藥物對白血病細胞殺傷作用的分子機制，并結合臨床數(shù)據(jù)分析GCSF對急性髓性白血病病人總生存率和無復發(fā)生存率的影響，探討CXCR4和miR146a作為臨床標志物的可能性及對于疾病預后的預測意義。實驗方法和結果第一部分人急性髓系白血病HL60、THP1細胞株中轉染miR146a過表達及抑制表達質粒，經GCSF100ngml預處理48h或不做任何處理后，用RTqPCR法檢測細胞內miR146a、CXCR

4、4mRNA表達情況，WesternBlotting法檢測細胞內總CXCR4蛋白表達情況，流式細胞術檢測表面CXCR4蛋白表達，PIAnnexinV雙染法檢測細胞凋亡情況，通過建立HS5白血病細胞共培養(yǎng)模型模擬骨髓微環(huán)境與白血病細胞之間的相互作用，驗證骨髓基質細胞對白血病細胞的保護作用，并通過構建transwell小室模型，比較不同組別間的細胞趨化能力。結果表明，GCSF可以通過上調miR146a的水平降低白血病細胞內CXCR4表達，從而

5、增加細胞的趨化，最終增加阿糖胞苷對其殺傷作用。第二部分人白血病HL60細胞株中轉染miR146a過表達及抑制表達質粒后，經GCSF100ngml預處理48h或不做任何處理后，用RTqPCR法檢測細胞內Smad4mRNA的表達，WesternBlotting法檢測細胞內Smad4蛋白表達，CCK8法檢測細胞增殖活性，PIAnnexinV雙染法檢測細胞凋亡情況，流式細胞術檢測細胞周期變化。結果表明，經GCSF處理后，HL60細胞內miR14