負(fù)壓創(chuàng)面療法治療感染性軟組織損傷相關(guān)機(jī)制研究.pdf

1、研究背景:
　　創(chuàng)面感染一直是骨科領(lǐng)域長期致力解決的難題。前期研究認(rèn)為:感染是細(xì)菌與宿主體內(nèi)環(huán)境相互作用的復(fù)雜過程;金葡菌致病力不僅與數(shù)量有關(guān),更取決于細(xì)菌菌群狀態(tài)和毒力因子表達(dá)。而且病原菌會(huì)適應(yīng)環(huán)境變化調(diào)節(jié)相應(yīng)的致病基因表達(dá)模式。負(fù)壓創(chuàng)面療法是一種能夠有效治療感染性軟組織損傷的治療方法,通過負(fù)壓引流作用可在不減少細(xì)菌數(shù)量的情況下,顯著控制感染,但其內(nèi)在機(jī)制尚不明確。本研究擬采用金黃色葡萄球菌感染軟組織損傷動(dòng)物模型,通過研究負(fù)壓創(chuàng)

2、面療法對(duì)金葡菌感染行為、群體感應(yīng)agr系統(tǒng)、毒力狀態(tài)以及機(jī)體固有免疫系統(tǒng)的作用機(jī)制,深化細(xì)菌性感染控制的認(rèn)識(shí)與理論。
　　目的:
　　1.探討負(fù)壓創(chuàng)面療法作用下細(xì)菌感染行為的改變與組織內(nèi)即時(shí)細(xì)菌數(shù)量的變化趨勢;2.探討負(fù)壓引流作用對(duì)金葡菌上游群體感應(yīng)系統(tǒng)的影響,以及毒力因子表達(dá)與含量的變化;3.通過對(duì)炎性因子表達(dá),固有免疫細(xì)胞趨化聚集的研究,探索負(fù)壓創(chuàng)面療法對(duì)機(jī)體固有免疫系統(tǒng)的影響。
　　方法:
　　1.建立金葡

3、菌感染軟組織開放性損傷動(dòng)物模型,通過常規(guī)無菌紗布治療與負(fù)壓創(chuàng)面療法的對(duì)照,應(yīng)用掃描電鏡(SEM)、透射電鏡(TEM)、激光共聚焦顯微鏡(LSCM)等方法分析創(chuàng)面表面及組織內(nèi)菌群形態(tài)、侵襲深度及數(shù)量變化,評(píng)估細(xì)菌感染行為的變化。
　　2.應(yīng)用上述實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ团c方法,通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Real-time PCR)、免疫印跡分析(Western Blot)評(píng)估金葡菌群體感應(yīng) agr系統(tǒng)活性,并檢測毒力因子的表達(dá)及含量。
　　3.

4、檢測創(chuàng)面組織內(nèi)炎性因子IL-1β、IL-8和TNF-α的表達(dá),對(duì)標(biāo)本進(jìn)行病理學(xué)檢查,并定量分析不同組織深度內(nèi)中性粒細(xì)胞聚集的數(shù)量。
　　結(jié)果:
　　1.相比無菌紗布治療,負(fù)壓創(chuàng)面療法作用下創(chuàng)面表面和組織內(nèi)細(xì)菌均呈散在分布,且隨治療時(shí)間延長逐步明顯;微菌群中的金葡菌散在分布,增生不活躍;同時(shí)細(xì)菌侵襲深度顯著減低。
　　2.無菌紗布治療與負(fù)壓創(chuàng)面療法兩組在治療day8時(shí),創(chuàng)面細(xì)菌數(shù)量分別為治療前的141.9±15.4％和3

5、4.6±5.5%(P<0.01);但根據(jù)相對(duì)比值的計(jì)算,細(xì)菌的絕對(duì)數(shù)量僅減少了一個(gè)數(shù)量級(jí),仍遠(yuǎn)高于10^5CFU/g組織。
　　3.相比無菌紗布治療,負(fù)壓創(chuàng)面療法能夠降低金葡菌agrA的表達(dá)。
　　4.負(fù)壓創(chuàng)面療法能夠顯著減少eap,spa和hla的表達(dá),其隨時(shí)間變化具有明顯減少趨勢;組織中上述毒力因子含量低于無菌紗布治療,隨治療時(shí)間延長而顯著減少。
　　5.在感染早期,負(fù)壓創(chuàng)面療法一方面能夠增加IL-1β和IL-8的

6、表達(dá),從調(diào)控上游激活固有免疫反應(yīng);另一方面抑制TNF-α的過度表達(dá),避免出現(xiàn)過度炎癥反應(yīng),降低自身損害。
　　6.負(fù)壓創(chuàng)面療法能夠有效促進(jìn)創(chuàng)面組織內(nèi)中性粒細(xì)胞聚集,尤其在細(xì)菌侵潤的創(chuàng)面淺表層中大量聚集。
　　結(jié)論:
　　1.負(fù)壓創(chuàng)面療法通過改變細(xì)菌的外部環(huán)境,從而影響菌群形態(tài)、增殖程度及侵襲深度等感染行為。
　　2.負(fù)壓創(chuàng)面治療一定程度上減少了組織內(nèi)細(xì)菌的數(shù)量,但不是控制感染的主要作用機(jī)制。
　　3.負(fù)壓作