牛源大腸桿菌耐藥性和耐藥基因檢測及對喹諾酮類藥物防突變濃度的測定.pdf

1、為預防和治療細菌性疾病，抗菌藥物被廣泛的應用于生物學領域，在畜禽養(yǎng)殖業(yè)中抗菌藥物更是作為飼料添加劑被大量使用，導致細菌耐藥現(xiàn)象變得嚴重，給細菌性疾病的防治帶來極大挑戰(zhàn)。大腸桿菌作為環(huán)境和機體共生菌，同時又是病原菌，其在耐藥性傳播方面的重要作用一直受到了人們的廣泛關注。
　　本研究根據(jù)大腸桿菌phoA持家基因序列設計引物，建立對牛源大腸桿菌的PCR檢測方法，測序結果顯示，擴展片段與大腸桿菌phoA持家基因相似性高，達99.7％，根據(jù)

2、建立的PCR檢測方法對臨床分離菌進行檢測，鑒定出105株牛源大腸桿菌。大腸桿菌phoA持家基因PCR檢測方法，與傳統(tǒng)鑒定方法相比具有靈敏度高，特異性強，檢測時間短等特點。
　　本研究參照CLSI推薦的Kirby-Baue法對105株分離菌進行藥物敏感性試驗。實驗結果顯示:分離菌對22種抗菌藥物均產(chǎn)生不同程度的耐藥性，對7種抗菌藥物的耐藥率超過50％，其中RA(84.76％)，AMP(73.58％)，TC(69.52％)，SIZ(5

3、9.05％)的耐藥情況嚴重，而對AMK(84.76％)，OFL(80.00％)，CIP(76.92％)和NOR(76.19％)等藥物較敏感，這些敏感藥物多為獸醫(yī)臨床較少使用的抗菌藥物。多重耐藥指數(shù)的計算結果顯示，不同地區(qū)其值存在顯著性差異。分離菌呈現(xiàn)多重耐藥現(xiàn)象，且不同地區(qū)耐藥譜系不同，105株分離菌表現(xiàn)出21種耐藥譜，其中最少耐1種藥物，最多耐21種藥物。分離菌對9種抗菌藥物的主要耐藥表型有15種，其中AMP+S+TC+C+SIZ和A

4、MP+SIZ耐藥表型所占比例最大。由此可見，檢測地區(qū)的牛源大腸桿菌多重耐藥現(xiàn)象較嚴重，耐藥譜廣，耐藥現(xiàn)狀復雜。
　　本研究采用PCR方法檢測耐藥基因，實驗結果證明:在被檢測的19種耐藥基因中，只有blaCMY-2基因沒有檢測到，其中sul3基因檢出率最高(28.57％)，qeqA基因檢出率最低(4.76％)，且不同地區(qū)耐藥基因的攜帶率存在差異。通過耐藥性和耐藥基因一致性分析可知，分離菌株中存在有耐藥性但不攜帶耐藥基因的情況;同時也

5、存在攜帶耐藥基因但不表現(xiàn)耐藥表型的情況。多重耐藥菌株的出現(xiàn)勢必對牛大腸桿菌病的防治帶來困難，臨床用藥時應選擇敏感藥物，防止耐藥性的產(chǎn)生。
　　本研究采用微量稀釋法和瓊脂平板稀釋法，分別測定環(huán)丙沙星和氧氟沙星對14株臨床分離牛源大腸桿菌敏感株的MIC和MPC，計算和SI。結果顯示氧氟沙星和環(huán)丙沙星的MIC90分別為0.47μg/ml和1.14μg/ml。以不同濃度MIC為基線測定2種藥物對大腸桿菌MPC，結果顯示氧氟沙星和環(huán)丙沙星對

6、牛源大腸桿菌敏感菌株的MPC90范圍分別為0.13～4.11μg/ml和0.96～32.22μg/ml，氧氟沙星的SI(2～8)低于環(huán)丙沙星的SI(8～32)。由此可見氧氟沙星的抗菌活力優(yōu)于環(huán)丙沙星，且防突變能力也強于環(huán)丙沙星。
　　綜上所述，本研究檢測的黑龍江部分地區(qū)的牛源大腸桿菌的耐藥情況較為嚴重，出現(xiàn)多重耐藥菌株，且攜帶多種耐藥基因。在防治細菌性疾病時，應在藥敏試驗的指導下選擇抗菌藥物，建立以MSW為理論依據(jù)的給藥策略，以防