氟喹諾酮類藥物對大腸埃希菌防耐藥突變體選擇濃度的研究.pdf

1、目的:(1)建立體外防細(xì)菌突變體選擇濃度(MPC)的測定方法。比較5種不同化學(xué)結(jié)構(gòu)的氟喹諾酮類藥物防細(xì)菌耐藥突變體選擇的能力。(2)探討不同藥物濃度、不同化學(xué)結(jié)構(gòu)藥物對突變選擇窗(MSW)內(nèi)篩選的細(xì)菌耐藥突變體的耐藥基因的影響。(3)應(yīng)用藥代動力學(xué)和藥效動力學(xué)(PK/PD)理論和MSW理論對臨床優(yōu)化氟喹諾酮給藥方案進行初步探討。 方法:(1)應(yīng)用肉湯富集細(xì)菌法測定氟喹諾酮類藥物對大腸埃希菌標(biāo)準(zhǔn)菌ATCC25922的MPC；瓊脂平

2、板二倍稀釋法測定最低抑菌濃度(MIC)；菌落計數(shù)法測定和描記細(xì)菌恢復(fù)生長曲線。測定ATCC25922和突變體的MSW和選擇指數(shù)(MPI)。(2)在突變選擇窗內(nèi)篩選細(xì)菌耐藥突變體，應(yīng)用PCR以及DNA測序方法確定其靶位突變位點。(3)在中國健康成年志愿者中進行單劑靜脈滴注甲磺酸帕珠沙星注射液藥代動力學(xué)試驗，用3p97程序計算藥代動力學(xué)參數(shù)，測定氟喹諾酮類藥物對大腸埃希菌臨床分離菌的MPC，計算AUC/MIC和TMSW等PK/PD參數(shù)。

3、 結(jié)果:(1)5種氟喹諾酮類藥物CPLX,PZLX,LVLX,GTLX和MXLX對E.coliATCC25922的MPC分別為0.06，0.09，0.09，0.048，0.072ug/ml；MPI分別為12，9，6.9，6.8，4；ATCC25922的細(xì)菌恢復(fù)生長曲線顯示MXLX和GTLX的平臺期明顯小于CPLX、LVLX和PZLX；從耐藥突變頻率看，LVLX和PZLX所致的耐藥突變頻率最高，CPLX和GTLX所致的耐藥突變頻率次之

4、，MXLX所致的耐藥突變頻率最小。從標(biāo)準(zhǔn)菌各步耐藥突變體的MIC來看，ATCC25922經(jīng)CPLX、LVLX和PZLX三步篩選就能從敏感菌株轉(zhuǎn)為中介耐藥，ATCC25922經(jīng)MXLX和GTLX三步篩選的突變體仍為敏感菌株。5種氟喹諾酮篩選的突變體的MSW的邊界較ATCC25922升高；PZLX和LVLX篩選的突變體的選擇指數(shù)較ATCC25922明顯增大。對CPLX和PZLX中介耐藥的突變體，對MXLX仍然敏感，但MXLX對突變體的MSW

5、上限較CPLX敏感的大腸埃希菌臨床分離菌的MSW上限明顯升高。(2)在5種氟喹諾酮對大腸埃希菌ATCC25922的MSW中隨機篩選了53株第一步突變體，其中有79％(42株)為Ser-83→Leu位點突變，19％(10株)為Asp-87→Asn，2％(1株)為Gly81→Asp位點突變，83位和87位為大腸埃希菌的常見突變位點，所有的第一步突變體均為gyrA基因位點突變。氟喹諾酮對Gly81→Asp位點突變的突變體MIC較Ser-83→

6、Leu突變的MIC低2～8倍，對Asp-87→Asn位點突變的突變體的MIC較Ser-83→Leu突變的MIC低1～2倍，Ser-83→Leu突變對細(xì)菌的敏感性影響最大，提示Ser-83→Leu是所有的突變位點中對耐藥影響最重要的位點。CPLX篩選的第二步突變體沒有新的位點改變，第三步突變體為Ser-83→Leu和Asp-87→Asn雙位點突變。(3)單劑靜滴甲磺酸帕珠沙星注射液250mg，500mg，750mg主要藥代動力學(xué)參數(shù)Cma

7、x分別為4.89±1.11mg.L-1、9.94±2.62mg.L-1、17.43±3.22mg.L-1；t1/2β分別為1.50±0.19h、1.38±0.27h、1.53±0.26h；AUC0-t分別為9.53±2.01mg·h·L-1、21.47±6.63mg·h·L-1、36.12±6.40mg·h·L-1；CPLX、GTLX、PZLX、MXLX對25株大腸埃希菌臨床分離菌的MPC90分別為2、1、2、1μg/ml；MPC90/

8、MIC90分別為16、4、16、2。PZLX250mg，500mg，750mg劑量組的PK/PD參數(shù)Cmax/MIC90分別為39.12，79.52，139.44，AUCo-12/MIC90分別為76.24，171.76，289，TMSW分別為50％，45.6％，51％。 結(jié)論:對5種氟喹諾酮，C-8-甲氧基喹諾酮MXLX抑制ATCC25922突變體的選擇能力強于LVLX、PZLX和C-8-氫喹諾酮CPLX，C-8-甲氧基喹諾酮

9、GTLX抑制ATCC25922突變體的選擇能力強于PZLX和CPLX，與LVLX近似。LVLX和PZLX篩選突變體的MPI較ATCC25922增大2～4倍，MSW增寬2～4倍，易篩選出新的耐藥突變體。氟喹諾酮對大腸埃希菌的主要靶位是GyrA，83位和87位突變?yōu)榇竽c埃希菌最常見突變位點。結(jié)合氟喹諾酮的藥代動力學(xué)參數(shù)，PZLX250mg，500mg，750mg三個劑量組中，500mg，750mg劑量組對大腸埃希菌臨床分離菌能達到較好的臨床