雞源性大腸埃希氏菌對(duì)氟喹諾酮類藥物的耐藥性研究.pdf

1、目的：利用分子生物學(xué)的方法檢測(cè)太原地區(qū)雞源性大腸埃希氏菌對(duì)氟喹諾酮類藥物的耐藥情況，旨在探討喹諾酮類藥物耐藥決定區(qū)(QRDR)的促旋酶、拓?fù)洚悩?gòu)酶以及孔道蛋白OmpC、OmpF基因變異情況。 方法采集山西省畜牧研究所種雞場(chǎng)30株雞源性大腸桿菌，用紙片法篩選出12株耐氟喹諾酮類藥菌的大腸桿菌，分別用gyrA、gyrB、parC、parE、ompC、ompF基因相應(yīng)的引物對(duì)12株耐氟喹諾酮類藥菌的大腸桿菌進(jìn)行PCR擴(kuò)增，并選擇其中4

2、株有代表性菌株進(jìn)行基因序列的測(cè)定；用SDS-PAGE電泳對(duì)12株耐藥菌的外膜蛋白進(jìn)行分析；用脈沖場(chǎng)凝膠電泳對(duì)12株耐藥菌進(jìn)行了流行情況分析。 結(jié)果所有檢測(cè)株中，其中12株菌對(duì)環(huán)丙沙星耐藥，占所采集標(biāo)本的40％；PCR實(shí)驗(yàn)gyrA、gyrB、parC、parE、ompC、ompF都有清晰的目的條帶；SDS-PAGE電泳結(jié)果顯示雞4、雞5號(hào)菌株外膜蛋白OmpC的表達(dá)缺失；脈沖場(chǎng)凝膠電泳結(jié)果分析顯示，存在小范圍的流行，爆發(fā)流行的幾率較

3、?。粶y(cè)序結(jié)果顯示，送檢的測(cè)序株都存在GyrA在83或87位氨基酸的變異(Ser-83→Leu；Asp-87→Asn)；雞5號(hào)菌株P(guān)arC在80位由由絲氨酸變位亮氨酸(Ser-80→Leu)，雞6號(hào)菌株P(guān)arC在第84位由谷氨酸變?yōu)橘嚢彼?Glu-84→Lys)；雞5號(hào)菌株P(guān)arE在89位絲氨酸變?yōu)楸彼?Ser-89→Ala)。結(jié)論山西省畜牧研究所養(yǎng)雞場(chǎng)的大腸桿菌對(duì)氟喹諾酮耐藥的主要機(jī)制是由于促旋酶在第83氨基酸、87位氨基酸發(fā)生一點(diǎn)或