寧夏地區(qū)牛源大腸桿菌優(yōu)勢血清型和毒力基因檢測及耐藥性分析.pdf

1、大腸桿菌(Escherichia coli,E.coli)，獸醫(yī)臨床上最常見的病原菌之一，可引起人和家畜禽的多種疾病，如引起幼畜嚴重腹瀉和敗血癥、豬水腫病、人的出血性結(jié)腸炎-溶血性尿毒綜合征、新生兒腦膜炎及腎炎等多種疾病。隨著養(yǎng)殖業(yè)的逐漸規(guī)模化，抗菌藥物的過度使用，導致大腸桿菌的耐藥性及其多重耐藥性已嚴重影響了獸醫(yī)臨床疾病的治療，因此對本地區(qū)奶牛乳房炎大腸桿菌進行毒力基因檢測和耐藥性分析及耐藥性分子流行病學的調(diào)查，不但對大腸桿菌引起的疾

2、病防治具有指導意義，而且有利于控制耐藥菌株的產(chǎn)生和傳播。
　　本研究采用微生物學和分子生物學方法對寧夏地區(qū)部分奶牛場臨床型及隱性乳房炎奶樣，進行大腸桿菌分離鑒定，應(yīng)用CLSI(2012)推薦的紙片擴散法(K-B)對其進行抗菌藥物敏感性試驗，采用O抗原平板凝集試驗鑒定大腸桿菌優(yōu)勢血清型，運用PCR擴增方法對大腸桿菌毒力基因及耐藥基因進行檢測。
　　1.2011～2013年采集寧夏地區(qū)部分奶牛場臨床型及隱性乳房炎奶樣，進行大腸桿

3、菌的分離鑒定。通過觀察大腸桿菌顯色培養(yǎng)基上細菌菌落形態(tài)、革蘭氏染色鏡檢和PCR擴增16SrDNA等方法進行大腸桿菌的鑒定，最終分離鑒定出197株大腸桿菌。
　　2.根據(jù)有關(guān)文獻，選取38種大腸桿菌O抗原血清，對197株奶牛乳房炎大腸桿菌進行O抗原血清鑒定。鑒定結(jié)果顯示，共有138株大腸桿菌被鑒定出血清型，優(yōu)勢血清型有O127(35/138)、O158(16/138)和O44(12/138)，有6株為自凝，53株未定型。
　　

4、3.對197株奶牛乳房炎大腸桿菌進行16種常用抗菌藥物的敏感性試驗，結(jié)果顯示，所分離的大腸桿菌對氨芐西林耐藥率最高，達到了54.69％，其次對多西環(huán)素(39.59％)、四環(huán)素(39.09％)和鏈霉素(38.58％)的耐藥率也較高。而對頭孢類、多粘菌素、氟苯尼考和喹諾酮類藥物則比較敏感，敏感率都在60％以上。分離株最多耐受15種抗菌藥物。
　　4.采用PCR方法對197株奶牛乳房炎大腸桿菌進行了毒力基因和耐藥基因的檢測，結(jié)果顯示，毒

5、力基因astA、eaeA、hlyA、escV和sepA以及耐藥基因tetB、tetC、GyrA、GyrB和ParC都被檢出。其中astA檢出率是21.13％，hlyA檢出率最低，只有1.02％。四環(huán)素類的2種耐藥基因tetC的陽性率為14.72％，tetB的陽性率是7.61％;氟喹諾酮類的GyrA、GyrB和ParC三種耐藥基因檢出率非常高，分別為97.46％、98.98％和98.48％。
　　綜上所述，本研究通過對寧夏地區(qū)奶牛乳