雞源性大腸桿菌的耐藥性監(jiān)測和質(zhì)粒DNA分析.pdf

1、雞大腸桿菌病是雞最常見和對養(yǎng)雞業(yè)危害最嚴(yán)重的傳染病之一，可引起胚胎死亡、臍炎、敗血癥、輸卵管炎和滑膜炎、肉芽腫、卵黃性腹膜炎和眼炎等一系列病癥。隨著我國養(yǎng)禽業(yè)集約化程度的提高，雞大腸桿菌病的流行勢頭也愈加猛烈，常常繼發(fā)感染其它疾病或混和感染，導(dǎo)致許多傳染病的發(fā)病率和死亡率明顯升高，以及大量的藥物、疫苗和人工等費(fèi)用的支出增加，給養(yǎng)禽業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失，其危害已居雞的細(xì)菌性疾病之首。 本研究對雞致病性大腸桿菌的流行情況進(jìn)行了調(diào)查

2、分析，從山東6個(gè)不同雞場：喬莊雞場、北十里雞場、土墻北雞場、東徐雞場、小栗元雞場和前九臺雞場共采集了41份病料，分離到了32株致病性大腸桿菌，重點(diǎn)對其生物學(xué)特性、耐藥性和質(zhì)粒DNA圖譜進(jìn)行了分析，從而探索出新的流行菌株的鑒定方法。 本課題共分為三個(gè)部分：第一部分：雞源大腸桿菌的某些生物學(xué)特性試驗(yàn)從山東省的6個(gè)雞場采集了41份雞內(nèi)臟病料，對其進(jìn)行了細(xì)菌分離鑒定，結(jié)果分離到了32株致病性大腸桿菌。對所分離菌株進(jìn)行小白鼠致病性試驗(yàn)，發(fā)

3、現(xiàn)其中有14株為高致病性大腸桿菌，18株為低致病性大腸桿菌；并對其分別進(jìn)行了溶血試驗(yàn)、血清型鑒定、剛果紅表型試驗(yàn)、血凝試驗(yàn)和D-甘露糖血凝抑制試驗(yàn)等生物學(xué)特性試驗(yàn)，探討了分離菌與致病力之間的關(guān)系。結(jié)果表明：大腸桿菌的致病力與其對豚鼠紅細(xì)胞的凝集性和溶血性有明顯相關(guān)性，而與血清型、剛果紅表型無關(guān)。 第二部分：雞源大腸桿菌的耐藥性監(jiān)測將分離到的32株致病性大腸桿菌采用kirby-bauer瓊脂擴(kuò)散法進(jìn)行藥物敏感性實(shí)驗(yàn)，選用11種臨床

4、常用抗生素和本實(shí)驗(yàn)室研制的利福平復(fù)合新藥同時(shí)進(jìn)行，發(fā)現(xiàn)從不同雞場分離到的大腸桿菌的藥物敏感性存在差異，相同雞場分離到的大腸桿菌的藥物敏感性也不盡相同，可能與各雞場平時(shí)用藥不同及菌株的血清型不同有關(guān)。通過試驗(yàn)表明：分離的菌株對12種藥物均有不同程度的耐藥性，對青霉素、四環(huán)素、紅霉素、利福平不敏感；對丁胺卡那霉素、頭孢唑啉和新研制的利福平復(fù)合新藥最敏感。雞源大腸桿菌易產(chǎn)生耐藥性，且為多重耐藥，本試驗(yàn)為臨床上科學(xué)用藥提供了依據(jù)，對有效防治大腸

5、桿菌病有一定的參考價(jià)值。 第三部分：部分雞源大腸桿菌的質(zhì)粒DNA指紋圖譜分析對分離到的14株雞大腸桿菌的優(yōu)勢血清型菌株進(jìn)行了質(zhì)粒DNA分析，通過堿裂解法小量提取質(zhì)粒，然后對質(zhì)粒進(jìn)行了瓊脂糖凝膠電泳分析，并用HindⅢ限制性內(nèi)切酶對質(zhì)粒進(jìn)行了酶切分析。結(jié)果表明：質(zhì)粒得率為100％，來源相同的菌株具有相同或相似的質(zhì)粒圖譜，屬于同一克隆，也就是說它們有共同的起源；來源不同的菌株的質(zhì)粒圖譜一般不同，屬于不同克隆，即有不同的起源。將血清型