合肥地區(qū)雞源大腸桿菌耐藥性檢測及相關(guān)耐藥基因研究.pdf

1、現(xiàn)代畜禽養(yǎng)殖業(yè)日趨規(guī)?；图s化，大腸桿菌病成為危害畜禽養(yǎng)殖業(yè)的主要傳染病之一，給其造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。因此，臨床上的各種抗菌藥物被用來防控大腸桿菌病，由于不合理地使用甚至濫用，大腸桿菌耐藥性日趨嚴(yán)重，多重耐藥菌株不斷增加，對養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展和人類的健康造成了嚴(yán)重威脅。本研究是為了解安徽省合肥地區(qū)雞源大腸桿菌（Escherichia coli，E.coli）的耐藥性現(xiàn)狀以及整合子基因盒（integrons and gene cassett

2、es）、超廣譜β-內(nèi)酰胺酶基因（ESBL,extended-spectrumβ-lactamase genes）、質(zhì)粒介導(dǎo)喹諾酮耐藥基因（PMQR,plasmid-mediated fluoroquinolone resistance）、四環(huán)素類耐藥基因、酰胺醇類耐藥基因和16S rRNA甲基化酶基因的流行狀況、連鎖情況及其傳播特點(diǎn)。
　　本研究從安徽省合肥地區(qū)四個(gè)養(yǎng)雞場采集、分離菌株，經(jīng)大腸桿菌鑒別培養(yǎng)基培養(yǎng)、微量生化試驗(yàn)管鑒定

3、及PCR（polymerase chain reaction）檢測，共鑒定出184株雞源大腸桿菌。
　　參考美國臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會（CLSI,2010）推薦的微量肉湯稀釋法對184株大腸桿菌進(jìn)行藥敏實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示，184株大腸桿菌對臨床上14種抗菌藥物的耐藥性有較大差異，對土霉素（97.8％）、磺胺六甲氧嘧啶（97.3%）、強(qiáng)力霉素（90.2%）、阿莫西林（82.6%）、洛美沙星（77.7%）、氧氟沙星（67.4%）、恩諾沙星（

4、55.9%）和氟苯尼考（52.7%）的耐藥率較高；對阿米卡星和沙拉沙星的耐藥率較低，分別是7.6%和2.2%。多重耐藥現(xiàn)象明顯，72.3%的菌株為6耐以上，13.6%的菌株耐10種以上抗菌藥物。
　　在獲得分離菌株藥物敏感性實(shí)驗(yàn)結(jié)果的基礎(chǔ)上，針對I、II型整合子的整合酶基因序列設(shè)計(jì)引物，用PCR方法檢測分離菌株中流行的整合子類型，然后設(shè)計(jì)可變區(qū)通用引物，擴(kuò)增整合子攜帶的基因盒插入?yún)^(qū)，測序分析其攜帶的基因盒種類。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，184株雞

5、源大腸桿菌中91株檢出I型整合子，檢出率為49.5%，未檢出II型整合子。I型整合子陽性菌株中70株擴(kuò)增出3種大小不同的基因盒插入?yún)^(qū)片段，主要是二氫葉酸還原酶基因（dfr）和氨基糖苷類抗生素耐藥基因（aadA），21株未擴(kuò)增出基因盒插入?yún)^(qū)片段；最普遍的基因盒列陣為dfrA1-tnpA IS26-aadA1。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析表明，整合子陽性菌株的多重耐藥率顯著高于整合子陰性菌株（p<0.05），說明大腸桿菌的多重耐藥性與整合子陽性檢出率顯著相關(guān)

6、。
　　本研究采用PCR方法檢測184株大腸桿菌中ESBL、PMQR、四環(huán)素類耐藥基因、酰胺醇類耐藥基因和16S rRNA甲基化酶基因的流行狀況，結(jié)果顯示，57.6%（106/184）的大腸桿菌檢測出了ESBL基因，46.2%（85/184）的大腸桿菌檢測出了PMQR基因，四環(huán)素耐藥基因和酰胺醇類耐藥基因的檢出率分別為17.4%（32/184），15.8%（29/184），只有一株大腸桿菌攜帶16S rRNA甲基化酶基因。

7、　　各種耐藥基因在82株大腸桿菌中存在連鎖流行的情況，其中，26株大腸桿菌攜帶3種耐藥基因，5株攜帶4種耐藥基因，攜帶5種耐藥基因的有3株，只有一株同時(shí)攜帶6種耐藥基因。
　　采用脈沖場凝膠電泳（pulsed field gel electrophoresis,PFGE）技術(shù)對91株I型整合子陽性菌株進(jìn)行分型，共分為63種亞型，譜型比較分散，未發(fā)現(xiàn)絕對優(yōu)勢譜型。
　　綜上所述，本研究認(rèn)為安徽省合肥地區(qū)雞源大腸桿菌的耐藥情況較