寧夏地區(qū)牛源金黃色葡萄球菌毒力基因檢測及耐藥性研究.pdf

1、獨創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的論文是我個人在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得寧夏大學或其它教育機構的學位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意。研究生簽名：和猻時間：渺莎年—奎月餾日關于論文使用授權的說明本人完全了解寧夏大學有關保留、使用學位論文的規(guī)定，即；學校有權

2、保留送交論文的復印件和磁盤，允許論文被查闋和借閱，可以采用影印、縮郎或掃描等復制手段保存、匯編學位論文。同意寧夏大學可以用不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學位論文的全部或部分內容。研究生簽名：榭時間：弦膨等了月’遙日導師簽名：尋精琢時間：沁“年歹月磚日摘要金黃色葡萄球菌廣泛的存在于自然界中，并且是一種對人與動物都有感染性的重要病原微生物。大環(huán)內酯類抗生素(Macrolides)是一類含有大環(huán)內酯基本化學結構的抗生素，在臨床實踐中，常常被應

3、用于治療由革蘭氏陽性菌等引起的感染。隨著大環(huán)內酯類抗生素的使用頻率越來越高，由此而產生的耐藥菌株也越來越多，導致臨床治療失敗。因此，對寧夏地區(qū)牛源性的金黃色葡萄球菌進行耐藥性調查及毒力基因、耐藥基因和生物被膜的檢測，不僅對臨床合理用藥具有指導意義，而且對獸醫(yī)臨床及公共衛(wèi)生都具有重要意義。本研究主要針對寧夏地區(qū)牛源金黃色葡萄球菌進行試驗，首先采集臨床及隱性乳房炎乳樣，通過革蘭氏染色鏡檢、科瑪嘉金黃色葡萄球菌顯色培養(yǎng)基初篩、雙重PCR方法檢

4、測16SrDNA和rluc基因進行金黃色葡萄球菌的鑒定，再根據(jù)CLSI標準委員會推薦的肉湯微量稀釋法，選用18種抗菌藥物對所分離鑒定出的金黃色葡萄球菌進行藥物敏感性試驗。結果顯示，共分離鑒定出231株金黃色葡萄球菌，分離率達到1684％；所分離的菌株對18種抗菌藥物呈現(xiàn)出不同程度的耐藥，耐藥率最高的是氨芐西林，達到792％，其次是青霉素(779％)、復方新諾明(654％)，對大環(huán)內酯類、林可酰胺類藥物的耐藥率在40％左右，但對阿莫西林克

5、拉維酸、頭孢唑林、阿米卡星、多西環(huán)素的敏感率較高，對喹諾酮類藥物和氨基糖苷類藥物的敏感率達60％89％。所分離的菌株主要以4、5、6、7耐居多，所占比例分別為225％、121％、113％、121％，分離菌株最多可耐受的抗菌藥物達到16種，多藥耐藥率達到848％。運用PCR擴增技術對231株金黃色葡萄球菌進行毒力基因及大環(huán)內酯類耐藥基因的檢測，結果顯示，7種毒力基因hla、hlb、clfa、pvl、sea、seb、SeC的檢出率分別為99

6、1％(229／231)、978％(226／231)、987％(228／231)、26％(6／231)、277％(64／231)、29O％(69／231)、56％(13／231)。介導主動泵出系統(tǒng)的msrA耐藥基因和可使作用靶位發(fā)生變化的ermC耐藥基因檢出率分別為553％、675％。由此可知，寧夏地區(qū)牛源金黃色葡萄球菌毒力基因主要流行基因型為hla、hlb、clfa。采用雙紙片法對31株耐藥表型為紅霉素耐藥且克林霉素敏感的金黃色葡萄球菌

7、進行誘導耐藥性的檢測，結果顯示，D試驗的陽性率為903％(28／31)。采用剛果紅法對23l株金黃色葡萄球菌進行生物被膜形成能力的檢測，其中有112株受試菌都具有形成生物被膜的能力，陽性率達到485％。綜上所述，本研究通過對寧夏地區(qū)牛源金黃色葡萄球菌進行耐藥性和毒力基因的研究以及對其生物被膜形成能力的初步檢測，揭示了金黃色葡萄球菌在寧夏地區(qū)奶牛場的耐藥情況和耐藥特征，為指導臨床合理用藥和控制耐藥菌的擴散提供理論依據(jù)，并為進一步研究細菌的