牛源金黃色葡萄球菌耐藥性分析及氟喹諾酮類耐藥基因檢測.pdf

1、金黃色葡萄球菌(StaphylococcusAureus，SA)是醫(yī)學(xué)和獸醫(yī)臨床上最常見的病原菌，可引起人和家畜的多種疾病。隨著抗菌藥物的廣泛應(yīng)用以至濫用，金黃色葡萄球菌對所有抗菌藥物的耐藥性及其多重耐藥性已嚴(yán)重影響了獸醫(yī)臨床抗感染的治療，因而對本地區(qū)牛源金黃色葡萄球菌進(jìn)行耐藥性分析及耐藥性分子流行病學(xué)的調(diào)查，不僅對金黃色葡萄球菌引起的疾病防治具有指導(dǎo)意義，而且有利于控制耐藥菌株的產(chǎn)生和傳播。
　　本研究采集了寧夏地區(qū)部分奶牛養(yǎng)殖

2、場臨床型和隱性型乳房炎奶樣，利用微生物學(xué)方法和分子生物學(xué)方法，對樣品中的金黃色葡萄球菌進(jìn)行分離鑒定。結(jié)果，從1263份樣品中分離鑒定出了227株金黃色葡萄球菌，分離率為17.97％，同時采用PCR方法對分離鑒定的金黃色葡萄球菌進(jìn)行16SrDNA、nuc基因擴增，從基因水平進(jìn)行確證，結(jié)果有220株金黃色葡萄球菌的16SrDNA、nuc基因為陽性，陽性率為17.42％，即本研究中微生物學(xué)鑒定與PCR方法鑒定的相符率為96.92％。
　

3、　依據(jù)CLSI推薦的紙片法對分離的220株金黃色葡萄球菌進(jìn)行了藥物敏感性測定。結(jié)果顯示，金黃色葡萄球菌對青霉素和氨芐西林的耐藥率最高，達(dá)到了83.18％，其次是氧氟沙星(56.37％)、阿莫西林/克拉維酸(51.82％)、環(huán)丙沙星(49.55％)，耐藥率在50％左右，對奎奴普丁/達(dá)福普丁等其他藥物的耐藥率從7.27％-40.5％不等，耐藥率最低的是美羅培南，耐藥率為2.27％，對萬古霉素完全敏感，所有分離的菌株最多對13種藥物耐藥，其中

4、6耐菌株最多，占到12.73％。
　　采用苯唑西林紙片擴散法檢測MRSA，結(jié)果檢測出2株耐甲氧西林金黃色葡萄球菌，9株菌位于耐藥和敏感菌之間，然后采用PCR法擴增所有菌的mecA基因和femA基因，發(fā)現(xiàn)除了MRSA陽性菌(ATCC33591)的mecA基因擴增出了與目的片段相符的DNA片段以外，被檢的220株菌中只有2株菌的mecA基因為陽性，檢出率為0.91％，所檢的220株菌的femA基因均擴增出了與目的片段相符的DNA片段，

5、陽性率為100％，即本次研究只檢測出2株MRSA菌株。
　　最后采用PCR法檢測了耐氟喹諾酮金黃色葡萄球菌grlA、gyrA、norA基因，結(jié)果顯示，gyrA基因檢出率為80％，norA基因檢出率為78.18％，grlA基因檢出率為78.64％。選取部分?jǐn)U增產(chǎn)物進(jìn)行測序，測序結(jié)果顯示grlA、norA基因的同源性為99％，gyrA基因的同源性為100％。
　　綜上所述，本研究通過對寧夏地區(qū)奶牛乳房炎金黃色葡萄球菌耐藥性分析和