社區(qū)感染性金黃色葡萄球菌耐藥現(xiàn)狀及對喹諾酮類藥物耐藥機制研究.pdf

1、目的：
　　1.了解溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院2010～2011年間從社區(qū)感染患者標本中分離的金黃色葡萄球菌的耐藥特征，為臨床抗菌藥物選擇提供依據(jù)。
　　2.研究2010～2011年不依賴耐藥背景的金黃色葡萄球菌對喹諾酮類抗菌藥物耐藥特征及喹諾酮類藥物耐藥機制。
　　3.研究質(zhì)粒介導(dǎo)的喹諾酮類耐藥基因的流行性。
　　方法：
　　1.回顧性調(diào)查2010～2011年間社區(qū)感染患者標本中分離的金黃色葡萄球菌的臨床分

2、布特點，分析金黃色葡萄球菌的耐藥特性。
　　2.瓊脂稀釋法檢測所有分離菌株對左旋氧氟沙星、環(huán)丙沙星的最低抑菌濃度(MIC)值。
　　3.細菌對喹諾酮類藥物三個耐藥機制的分析:
　　(1)主動外排機制檢測:相同條件下檢測并觀察含與不含羰基氰基3-氯苯腙(CCCP)條件下菌株對喹諾酮類藥物的MIC值的變化，分析主動外排機制存在對細菌MIC值的影響。
　　(2)染色體介導(dǎo)喹諾酮耐藥機制檢測:PCR擴增染色體介導(dǎo)的grl

3、A和gyrA基因，并分析其突變位點。
　　(3)細菌質(zhì)粒介導(dǎo)的喹諾酮耐藥機制檢測:PCR篩選質(zhì)粒介導(dǎo)的喹諾酮耐藥基因(qnr，aac(6')-Ib-cr，qepA)，陽性產(chǎn)物進行DNA測序以確定基因型。
　　4.耐藥基因的水平轉(zhuǎn)移分析。本實驗采用了濾膜接合試驗研究了金黃色葡萄球菌中質(zhì)粒介導(dǎo)的喹諾酮耐藥基因qnrD的水平傳播性。
　　5.脈沖場電泳分析質(zhì)粒介導(dǎo)的喹諾酮耐藥基因的流行性。
　　結(jié)果：
　　1.本

4、研究中169株金黃色葡萄球菌主要來源于精液標本，占70.4％(119/169)，其次為膿液、陰道分泌物、尿道拭子、血液和痰液等;臨床常用抗菌藥物中，敏感性最好的為萬古霉素和利奈唑胺，敏感率達100％;其次為呋喃妥因（敏感率為99.4％）和替考拉寧（敏感率為95.9％）;耐藥率最高的為青霉素（不敏感率達89.4％），其次為紅霉素（不敏感率為60.4％）、頭孢西?。ú幻舾新蕿?3.9％）;四環(huán)素、左旋氧氟沙星、環(huán)丙沙星不敏感率均在30％以上

5、。
　　2.外排泵表型抑制試驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，試驗選取的30株細菌中有26株在含有CCCP平板上的MIC值比不含CCCP平板上細菌的MIC值下降超過4倍。這表明外排泵是參與金黃色葡萄球菌耐藥的一個關(guān)鍵因素。剩余4株菌的MIC變化不大，可能存在其他的耐藥機制。
　　3.本批研究菌株主要是拓撲異構(gòu)酶Ⅳ(grlA)編碼蛋白的密碼子在第80位和84位的改變，并在耐藥株中發(fā)現(xiàn)了2個新的突變:grlA(Glu-92→Asp)，gyrA(Pro

6、-63→ser)。
　　4.首次在金黃色葡萄球菌中檢測出質(zhì)粒介導(dǎo)的喹諾酮耐藥基因(PMQR)，且全部為qnrD基因，但濾膜接合試驗沒有成功獲得接合子。
　　5.脈沖場同源性分析顯示著5例qnrD基因陽性菌株存在主要克隆型（克隆A）。
　　結(jié)論：
　　1.社區(qū)感染患者標本中分離的金黃色葡萄球菌對多種抗菌藥物的耐藥現(xiàn)象嚴重。
　　2.社區(qū)感染患者中分離的金黃色葡萄球菌對喹諾酮的主要耐藥機制是拓撲異構(gòu)酶Ⅳ(grl