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1、目的:研究MRSA進(jìn)化的基本規(guī)律,勾勒出MRSA進(jìn)化的概略圖。通過病例對(duì)照研究獲得我國hVISA感染的相關(guān)臨床信息并對(duì)危險(xiǎn)因素和病死率相關(guān)性進(jìn)行分析。初步研究hVISA耐藥機(jī)制相關(guān)基因。
方法:收集北京協(xié)和醫(yī)院1994-2008年466株非重復(fù)金黃色葡萄球菌(包括302株MRSA和164株MSSA),進(jìn)行SCCmec、spa、脈沖場(chǎng)凝膠電泳(PFGE)和多位點(diǎn)序列分析(MLST)分型。采用BHIT5(含替考拉寧5μg/ml
2、的腦心浸液瓊脂平皿)、BHIV6(含萬古霉素6μg/ml的腦心浸液瓊脂平皿)和MET法篩選MRSA中的hVISA并使用改良PAP-AUC(菌群譜型分析)法進(jìn)行確認(rèn)。通過病例調(diào)查表(CRF)的形式收集hVISA組和對(duì)照組的臨床相關(guān)信息,使用student t檢驗(yàn)、Mann-Whitney檢驗(yàn)、χ2檢驗(yàn)以及fisher精確檢驗(yàn)等統(tǒng)計(jì)方法對(duì)病例資料進(jìn)行回顧性分析。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR研究hVISA耐藥相關(guān)基因agr的轉(zhuǎn)錄水平。
3、 結(jié)果:302株MRSA共發(fā)現(xiàn)12個(gè)spa型和9個(gè)STs型。在1994-2000年之間,MRSA最流行的克隆是ST239-MRSA-Ⅲ-spa t037;自從2000年開始,ST239-MRSA-Ⅲ-spa t030很快取代以前的優(yōu)勢(shì)克隆t037,并且成為最流行的克隆。在2002年,另一個(gè)MRSA克隆ST5-MRSA-Ⅱ-spa t002出現(xiàn),并且一直維持一個(gè)很低的流行水平。164株MSSA共發(fā)現(xiàn)62個(gè)spa型和40個(gè)STs型。在MSS
4、A中,ST398是最常見的STs型,其他依次為ST59、ST7、ST15和ST1。一些MSSA基因型(包括ST398、ST1、ST121和ST59與一些流行的CA-MRSA基因型相同。MLST eBURST分析顯示ST5、ST59和ST965克隆共同存在于MRSA和MSSA中,這提示MRSA可能通過MSSA獲得SCCmec進(jìn)化而來。依照臨床病例資料,2株pvl陽性菌株ST59-MRSA-Ⅳ為CA-MRSA。hVISA組與VSSA組在萬古
5、霉素MIC水平上存在顯著差異(80%versus24.9%,P<0.001),hVISA組萬古霉素MIC值高于VSSA組。回顧性病例對(duì)照研究發(fā)現(xiàn),hVISA組和VSSA組在臨床治療、結(jié)局及感染相關(guān)病死率方面無差異。盡管如此,hVISA組與VSSA組住院天數(shù)存在差異(P=0.025),hVISA感染的患者住院時(shí)間延長(zhǎng)。與相應(yīng)的VSSA相比,10株hVISA中有9株RNAⅢ的轉(zhuǎn)錄水平下調(diào),其中下調(diào)最大的達(dá)1000倍。
結(jié)論:新
6、出現(xiàn)的MRSA克隆ST239-MRSA-Ⅲ-spa t030很快取代了以前的舊克隆ST239-MRSA-Ⅲ-spa t037,這說明這15年間北京協(xié)和醫(yī)院MRSA流行克隆發(fā)生了一個(gè)快速的變遷。hVISA組萬古霉素MIC水平顯著高于VSSA組,但多種新型抗菌藥物對(duì)其具有良好活性。hVISA感染與萬古霉素治療失敗無相關(guān)性,hVISA感染的患者住院時(shí)間延長(zhǎng),對(duì)hVISA臨床意義的研究可能需要進(jìn)行大樣本的前瞻性隊(duì)列研究。agr轉(zhuǎn)錄水平的下調(diào)與萬
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