小鼠心衰與相關(guān)信號(hào)通路間聯(lián)系的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一部分 目的：通過(guò)觀察MyD88/dnMyD88、Akt/GSK3β等信號(hào)分子在dnMyD88小鼠心肌組織中表達(dá)水平的的變化，以進(jìn)一步探討相關(guān)信號(hào)通路與dnMyD88小鼠心功能變化機(jī)制間的聯(lián)系。 方法：不同周齡的dnMyD88小鼠，根據(jù)genotyping結(jié)果分為Tg組和Wt組。于指定周齡行心臟二維超觀察各組小鼠心臟結(jié)構(gòu)和功能變化后，取小鼠心肌組織送檢病理，提取心肌細(xì)胞mRNA以RT-PCR法觀察心肌肥厚和心肌重塑指標(biāo)

2、ANF、BNP變化，同時(shí)提取各組小鼠心肌組織蛋白western-blot法測(cè)定小鼠心肌組織內(nèi)MyD88/dnMyD88、Akt/pAkt、GSK3β/pGSK3β等信號(hào)分子表達(dá)水平的變化。 結(jié)果：Tg組小鼠8周時(shí)解剖病理發(fā)現(xiàn)心肌細(xì)胞體積增大、心肌纖維增生；18周時(shí)小鼠心肌組織出現(xiàn)心肌細(xì)胞以及心肌細(xì)胞核大小不一致，形態(tài)不規(guī)則，核膜出現(xiàn)皺褶，心肌纖維間質(zhì)增多。Tg組小鼠心肌重塑指標(biāo)ANF和BNP的mRNA表達(dá)水平明顯高于野生對(duì)照組，

3、并隨周齡增長(zhǎng)ANF、BNP表達(dá)水平出現(xiàn)遞增現(xiàn)象，提示dnMyD88 Tg組小鼠心肌重塑隨齡加重。心臟二維超發(fā)現(xiàn)Tg組小鼠室壁變薄，室腔增大，左室質(zhì)量指數(shù)增加，心功能明顯下降，隨著周齡增長(zhǎng)上述指標(biāo)的變化更為明顯。與此同時(shí)，western-blot發(fā)現(xiàn)Tg小鼠心肌組織內(nèi)MyD88、dnMyD88、pAkt、pGSK3β表達(dá)水平以及pAkt/Akt、pGSK3β/GSK3β比值均明顯高于野生對(duì)照組，提示在dnMyD88 Tg組小鼠心肌組織內(nèi)相

4、關(guān)信號(hào)通路激活與出現(xiàn)的心臟結(jié)構(gòu)、功能變化間存在聯(lián)系。 結(jié)論：在dnMyD88轉(zhuǎn)基因小鼠中隨周齡增加而出現(xiàn)了心室腔擴(kuò)大、室壁變薄和心功能下降，并呈現(xiàn)進(jìn)行性加重，后期心臟組織結(jié)構(gòu)及超聲出現(xiàn)類似于人類擴(kuò)張性心肌病的表現(xiàn)。心肌組織中MyD88表達(dá)水平?jīng)]有被特異性表達(dá)的dnMyD88所抑制，相反出現(xiàn)了異常上升；而心肌組織pAkt和pGSK3β表達(dá)水平的升高提示dnMyD88轉(zhuǎn)基因小鼠心肌中存在hkt/GSK3 D信號(hào)通路的活化。而Akt/

5、GSK3β信號(hào)通路是否確實(shí)參與了對(duì)dnMyD88轉(zhuǎn)基因小鼠心臟結(jié)構(gòu)和功能變化的調(diào)控有待進(jìn)一步探討。 第二部分Rapamycin對(duì)dnMyD88小鼠心功能及相關(guān)信號(hào)通路的影響 目的：觀察dnMyD88小鼠心臟結(jié)構(gòu)和功能以及相關(guān)信號(hào)分子在Rapamycin干預(yù)前后的變化，在進(jìn)一步探討相關(guān)信號(hào)通路與dnMyD88小鼠心臟結(jié)構(gòu)和功能變化問(wèn)聯(lián)系同時(shí)，為心衰的干預(yù)探討新的思路。 方法：dnMyD88小鼠按照genotypin

6、g結(jié)果、周齡分組，并根據(jù)是否接受Rapamycin干預(yù)分為干預(yù)組和對(duì)照組。各干預(yù)組小鼠接受劑量2mg/kg的Rapamycin為期14天腹腔注射，而對(duì)照組接受等量溶劑注射。注射完成后給予各組小鼠二維超聲心動(dòng)圖檢查觀察心臟結(jié)構(gòu)和功能變化，并分別以RT-PCR和western-blot方法測(cè)定心肌組織內(nèi)ANF、BNP及MyD88、dnMyD88、Akt、GSK3β、NF-κB等表達(dá)水平的變化。 結(jié)果：各周齡Rapamycin干預(yù)組T

7、g小鼠超聲心功能指標(biāo)(EF、FS)較Tg對(duì)照組小鼠均有明顯改善，Tg18周齡干預(yù)組小鼠的IVSTD、LVD、LVPWD、LVmass等心臟結(jié)構(gòu)指標(biāo)較對(duì)照組也有明顯改善。各周齡干預(yù)組小鼠心肌組織ANF和BNP表達(dá)水平較對(duì)照組明顯降低；pAkt、pGSK3β以及pAkt/Akt、pGSK3β/GSK3β比值較對(duì)照組也有顯著下降。而MyD88和dnMyD88表達(dá)水平在干預(yù)組和對(duì)照組間沒(méi)有明顯差異。 結(jié)論：Akt信號(hào)通路mTOR抑制劑R

8、apamycin可以在抑制dnMyD88轉(zhuǎn)基因小鼠心肌組織Akt活化、GSK3β失活同時(shí)改善其心功能，提示Akt、GSK3β信號(hào)通路的變化與dnMyD88 Tg小鼠心衰出現(xiàn)可能存在密切聯(lián)系；另一方面還提示Rapamycin可能可以應(yīng)用于心衰的防治。 第三部分 目的：觀察B6小鼠自然增齡過(guò)程中心臟結(jié)構(gòu)、功能與相關(guān)信號(hào)通路變化間的聯(lián)系以及Rapamycin對(duì)增齡小鼠心功能和相關(guān)信號(hào)通路的影響 方法：雄性C57BL/6

9、J(B6)小鼠按照周齡分為8周、28周、48周組，并根據(jù)是否接受Rapamycin干預(yù)分為干預(yù)組和對(duì)照組。各周齡干預(yù)組小鼠接受劑量2mg/kg的Rapamycin為期14天的腹腔注射，而對(duì)照組接受等量溶劑注射。注射完成后給予各組小鼠二維超聲心動(dòng)圖檢查觀察心臟結(jié)構(gòu)和功能變化，并分別以RT-PCR和western-blot方法測(cè)定心肌組織內(nèi)ANF、BNP以及Akt、GSK3β、NF-κB等表達(dá)水平的變化。 結(jié)果：心臟超聲發(fā)現(xiàn)隨周齡增

10、長(zhǎng)小鼠心臟出現(xiàn)室壁增厚趨勢(shì)；心功能指標(biāo)EF和FS也出現(xiàn)下降趨勢(shì)但沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；心肌組織內(nèi)ANF和BNP的表達(dá)水平亦隨周齡同步上升，以ANF更為明顯；心肌組織內(nèi)pAkt/Akt、pGSK3β/GSK3β比值隨周齡也出現(xiàn)明顯上升。Rapamycin干預(yù)組小鼠室壁厚度和ANF、BNP表達(dá)水平顯著降低，而心肌組織內(nèi)phkt/Akt、pGSK3β/csK3 β比值明顯恢復(fù)。 結(jié)論：Akt/GSK3β信號(hào)通路可能參與了雄性B6小鼠增齡過(guò)程