阿霉素大鼠心臟膠原重塑中AT1受體與CaN信號通路間關系的實驗研究.pdf

1、目的: 心肌重塑是指心臟在各種外界因素作用后出現(xiàn)的一系列組織細胞形態(tài)學的病理變化，包括心肌細胞肥大、和以間質膠原增生、纖維化為特征的心肌間質膠原重塑。心肌重塑是擴張型心肌病(DCM)慢性心力衰竭的主要病理學基礎，是心功能由代償向失代償期轉變的重要病理過程。在慢性心衰的發(fā)病機制中，腎素一血管緊張素一醛固酮系統(tǒng) (RAAS) 的過度激活是加重心肌損傷、心肌重塑、促進心衰進展的重要因素。血管緊張素Ⅱ(AngⅡ) 是RAAS的主要效應分子，研究

2、發(fā)現(xiàn)AngⅡ可促使心肌成纖維細胞(CFs) 增殖，合成分泌膠原等細胞外基質成分，介導間質纖維化，參與心肌重塑。AngⅡ受體（AT）包括AT1和AT2，AT1受體存在于心肌細胞、血管平滑肌細胞、內皮細胞、神經末梢和傳導系統(tǒng), 介導血管收縮、腎臟對水的潴留、醛固酮和血管加壓素的釋放以及交感神經的激活等反應等所有已知的AngⅡ的心血管作用。AngⅡ通過激活心肌細胞膜AT1受體，激活多種細胞內信息轉導過程, 從而促進細胞生長, 引起心肌細胞肥大

3、和間質增生。鈣調神經磷酸酶(CaN)是一種受細胞內Ca2+ 及鈣調素調節(jié)的多功能信號酶，已經證實依賴CaN的信號通路在介導心肌細胞肥大反應性基因的表達、促進心肌肥厚中起著重要作用，但對心臟CFs增殖、膠原合成、心肌膠原重塑信號轉導的作用國內外還較少研究，特別是與AT1受體間關系罕有報告，本研究借助經典的阿霉素大鼠DCM心室重塑動物模型，研究CaN信號通路的在心室膠原重塑中的作用，及其與AT1受體間的關系，從分子水平探討DCM心室重塑的發(fā)

4、病機制，為開辟DCM的治療新的思路提供一定的實驗依據。
　　 方法: 將8周齡、清潔級雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠[徐州醫(yī)學院實驗動物中心供應]體重250±10g。 隨機分為三組：（1）正常對照組（NC組）：生理鹽水2ml/kg腹腔注射，每周一次，共8周，8只；（2）單純模型組（ADM組）：鹽酸多柔比星（浙江海正藥業(yè)有限公司生產，批號:H33021980）2mg/kg體重腹腔注射，每周1次，共8周，12只；(3)

5、氯沙坦組(LOS組)：鹽酸多柔比星2mg/kg體重腹腔注射，每周1次，共8周，12只，氯沙坦（杭州默沙東制藥有限公司，批號：50mg H20000371）10mg/kg體重灌胃，于首次阿霉素用后4周開始，1次/日，共4周，末次注射ADM后10天，無菌取出心臟。本實驗檢測的指標有:（1）所有大鼠稱體重(BW)、心臟重量（CW）和左室重量（LVW）計算心重指數(shù)（CWI=CW/BW)、左室指數(shù)（LVWI=LVW/BW）；（2）采用免疫組化法檢

6、測心肌Ⅰ、Ⅲ型膠原表達及比值；（3）采用Western blot法檢測AT1受體表達（4）采用活性比色定量法測定心肌組織CaN的活性。
　　 結果:
　　 1. 光鏡下心肌病理改變：對照組心肌細胞排列均勻整齊，橫紋清楚，細胞大小均一，心肌細胞間隙無變化。模型組心肌細胞肥大、伸長、灶狀壞死,肌質變性,核大、深染，間質纖維化、膠原增生，證實阿霉素誘導SD大鼠心肌膠原重塑模型是成功的。氯沙坦組大部分心肌組織呈平行排列，結構清晰

7、，間質有少量疏松結締組織。
　　 2.心重指數(shù)（ CWI）和左室指數(shù)（LVWI）：模型組（2.86±0.05，2.20±0.02）與正常對照組（2.78±0.02，2.18±0.01 ）相比，CWI和LVWI均升高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）；與模型組比較，氯沙坦（2.82±0.05，2.19±0.03）治療組CWI和LVWI均有不同程度下降，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）；氯沙坦治療組與正常對照組比較，CWI和LVWI

8、無明顯差別。
　　 3. 心肌I、III型心肌膠原的表達及I／III比值：模型組（62547.1±2440.8， 49485.0±2020.5,1.26±0.01）與正常對照組（605.1±35.3，528.2±31.6,1.15±0.03）相比，I、III型心肌膠原的表達及比值均升高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）；氯沙坦治療組（14572.1±425.1,11847.2±436.9,1.23±0.02）與模型組比較，I、I

9、II型心肌膠原的表達及比值均降低，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01），但與對照組比較，I、III型心肌膠原的表達及比值仍均升高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。
　　 4. 心肌組織AT1受體的表達：模型組(6582±562.88)與正常對照組(3623±82.64)相比，AT1受體的表達上調，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）；氯沙坦組(4132±546.25)與模型組相比，AT1受體的表達下調，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）

10、。 5.心肌組織鈣調神經磷酸酶(CaN)活性：與正常對照組（0.283±0.010）相比，模型組（0.465±0.040）CaN活性增高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）；與模型組比較，氯沙坦治療組（0.326±0.050）CaN活性降低，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。
　　 結論:
　　 1. 在阿霉素誘導的SD大鼠心肌膠原重塑中，CaN信號通路介導了心肌纖維化的信號轉導；
　　 2. SD大鼠的心肌纖維化