抑制Hedgehog信號通路對小鼠胚胎間充質(zhì)干細(xì)胞成脂分化的影響.pdf

1、肌內(nèi)脂肪是影響豬肉風(fēng)味的重要因素之一，肌內(nèi)脂肪含量過低導(dǎo)致肉制品風(fēng)味下降。肌內(nèi)脂肪含量性狀與瘦肉率性狀之間呈負(fù)相關(guān)，單靠遺傳育種同時解決豬的瘦肉率和肌內(nèi)脂肪含量問題已經(jīng)遇到瓶頸。因此我們試圖尋求一種育種方式能在提高瘦肉率的同時又保證肌內(nèi)脂肪含量不降低。通過Hedgehog信號途徑在胚胎發(fā)育期調(diào)控間充質(zhì)干細(xì)胞向脂肪方向分化，以此機理指導(dǎo)豬的育種工作，篩選出提高豬的瘦肉率并能增加肌內(nèi)脂肪含量的最佳育種組合，為我國瘦肉型豬的培育和豬肉品質(zhì)調(diào)控

2、研究提供新的研究思路。
　　Hedgehog信號通路廣泛存在于脊椎動物和無脊椎動物體內(nèi)，在動物胚胎多種組織器官的生長發(fā)育過程中發(fā)揮重要作用。近年來，越來越多的國內(nèi)外研究已證明，Hedgehog信號通路在動物脂肪細(xì)胞的生長發(fā)育過程中發(fā)揮調(diào)控作用。激活動物體內(nèi)Hedgehog信號通路能夠抑制脂肪細(xì)胞的生長發(fā)育，然而反過來抑制動物體內(nèi)的Hedgehog信號通路是否能促進脂肪細(xì)胞的分化尚未明確。因此，本文就此問題展開研究，旨在尋找一種能在

3、不降低瘦肉率的前提下提高肌內(nèi)脂肪含量的科學(xué)方法，為瘦肉型豬的培育和豬肉品質(zhì)調(diào)控研究提供參考依據(jù)。
　　本研究旨在解析Hedgehog信號通路在小鼠胚胎間充質(zhì)干細(xì)胞成脂分化過程中發(fā)揮的作用，為瘦肉型豬的培育和豬肉品質(zhì)調(diào)控研究提供參考依據(jù)。本研究構(gòu)建小鼠間充質(zhì)干細(xì)胞 C3H10T1/2細(xì)胞系為試驗?zāi)Ｐ?，用不同濃度環(huán)靶明（5μmol/L,10μmol/L,15μmol/L或20μmol/L）處理細(xì)胞，同時參考添加成脂誘導(dǎo)劑（10μg/m

4、L胰島素，1mmol/L地塞米松，200μmol/L吲哚美辛，0.5mmol/L IBMX）對細(xì)胞的成脂分化誘導(dǎo)作用，分別在誘導(dǎo)的第1天、第2天、第3天、第7天、第14天和第21天提取細(xì)胞 mRNA和蛋白用于后續(xù)試驗。qRT-PCR法檢測Hedgehog信號通路相關(guān)基因、成脂分化調(diào)控基因 PPARγ，C/EBPα以及成脂分化標(biāo)志基因FABP4在轉(zhuǎn)錄水平上的表達情況；采用western blot法檢測Hedgehog信號通路蛋白、成脂分化

5、調(diào)控蛋白和FABP4蛋白的表達水平；利用油紅O染色法，檢測細(xì)胞內(nèi)脂滴形成情況。
　　試驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，使用環(huán)靶明誘導(dǎo)C3H10T1/2細(xì)胞導(dǎo)致細(xì)胞Hedgehog信號通路各基因相對表達量下降，成脂分化調(diào)控基因以及成脂分化標(biāo)志基因FABP4相對表達量升高。其中10μmol/L環(huán)靶明處理的細(xì)胞效果最明顯，Hedgehog信號通路各基因相對表達量顯著下降（P<0.05），成脂分化調(diào)控基因以及成脂分化標(biāo)志基因FABP4相對表達量升高（P<0.