補腎化痰法影響骨髓間充質(zhì)干細胞成脂和成骨分化的實驗研究.pdf

1、目的： 從形態(tài)學、標志物蛋白合成(LPL 、ALP、OCN)的角度，分別觀察補腎法、化痰法、補腎化痰法對BMSCs成脂分化和成骨分化的影響，探討補腎化痰法治療骨質(zhì)疏松癥的可能作用機制． 方法： 1.運用全骨髓貼壁法分離培養(yǎng)純化Wsitar大鼠BMSCs. 2.從細胞形態(tài)學、流式細胞儀檢測細胞表面抗原等角度進行鑒定BMSCs． 3.使用1μmol/L_，地塞米松、0.5mmol/L IBMX、0.2

2、mmol/L 吲哚美辛、10μg/mL胰島素聯(lián)合誘導(dǎo)BMSCs成脂分化，通過細胞形態(tài)學觀察、油紅O染色及定量和用RT-PCR檢測脂蛋白脂酶(LPL)mRNA表達，探討補腎中藥、化痰中藥和補腎化痰中藥分別對BMSCs成脂分化的影響。 4.使用0.1μmol/L地塞米松，10 mmol/L β-甘油磷酸鈉，50μg/mL Vitamin C聯(lián)合誘導(dǎo)BMSCs成骨分化，通過檢測茜素紅染色及定量、堿性磷酸酶(ALP)活性和骨鈣素(OCN

3、) mRNA表達，探討補腎中藥、化痰中藥和補腎化痰中藥對BMSCs成骨分化的影響． 結(jié)果： 1.采用全骨髓貼壁法可穩(wěn)定獲得均質(zhì)性良好的大鼠BMSCs。 2.流式細胞儀檢測大鼠BMSCs表面標志抗原CD29、CD44表達陽性，CD45表達陰性． 3.化痰中藥能使BMSCs誘導(dǎo)形成的脂肪細胞減少，并下調(diào)成脂相關(guān)基因LPL-mRNA表達。 4.補腎化痰中藥能促進BMSCs成骨誘導(dǎo)后細胞體外鈣化，提高細胞