BMP-2在體外對骨質疏松患者的骨髓間充質干細胞成脂分化的影響.pdf

1、目的：
　　體外貼壁培養(yǎng)獲得純度較高的骨質疏松患者骨髓間充質干細胞（OPBMSCs），為進一步實驗打好可靠基礎，探討不同濃度骨形態(tài)發(fā)生蛋白2( BMP2)在體外對骨質疏松患者骨髓間充質干細胞（OPBMSCs）成脂分化中的影響，并為臨床指導骨質疏松治療方案提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　抽取骨質疏松患者的骨髓，在體外用貼壁培養(yǎng)法獲得原代OP BMSCs，流式細胞儀檢測P2細胞表面抗原標志物；取第二、三代細胞用于實驗：1個

2、對照組+5個實驗組：實驗組分兩個階段進行操作：第一階段用成脂誘導液誘導3天，第二階段在成脂誘導液中添加不同濃度的BMP-2（ng/ml）0.5、5、50、100、500分別繼續(xù)誘導14天；而對照組始終用常規(guī) BMSCs培養(yǎng)基培養(yǎng)。各組經(jīng)誘導后第17天油紅O染色，觀察細胞脂滴染色情況及檢測細胞成脂OD值。同時WB檢測PPAR-γ、C/EBPa蛋白質表達情況以及Q-PCR檢測PPAR-γ、C/EBPa基因表達水平。
　　結果：

3、　　貼壁培養(yǎng)法分離、傳代獲得第二代干細胞，流式結果P2表達CD44、HLA-ABC、CD105均>92％，而陰性抗原CD34、CD45表達均<7%，可以說明OPBMSCs純度高。各實驗組經(jīng)誘導17天后，油紅O染色圖片觀察示：BMP-2濃度（ng/ml）在0.5到50的濃度下脂滴數(shù)呈現(xiàn)增多趨勢；而在50到500的濃度下脂滴數(shù)呈下降趨勢，濃度500與0這兩組脂滴數(shù)量相近。脂肪定量OD值統(tǒng)計學分析：對照組與任何實驗組脂肪含量對比，P<0.05

4、，可以認為對照組的脂肪含量比任何實驗組都要低；實驗組BMP2濃度（ng/ml）在5與50對比，P<0.05，說明在此區(qū)間脂肪含量呈上升趨勢，具有BMP2濃度依賴性；而BMP-2濃度100與500對比，P<0.05，說明在此區(qū)間脂肪含量呈下降趨勢。成脂肪相關轉錄因子PPARγ、C/EBP及蛋白表達水平也證明呈現(xiàn)與脂肪定量OD值相類似趨勢。
　　結論：
　　貼壁培養(yǎng)可以獲得高純度OPBMSCs，為實驗提供可靠基礎。低濃度BMP2