全反式維甲酸抑制大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成脂分化信號(hào)通路中Fosl1直接調(diào)控PPARγ2.pdf

1、目的：研究激活蛋白（activator protein-1，AP-1）在全反式維甲酸（all-trans retinoic acid，ATRA）抑制大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（bone marrow mesenchymal stem cell，BMSC）成脂分化信號(hào)通路中的調(diào)控機(jī)制。
　　方法：采用SD大鼠原代BMSCs，體外分離，培養(yǎng)和成脂分化誘導(dǎo)。油紅 O染色鑒定細(xì)胞成脂分化中脂滴形成情況。成脂誘導(dǎo)在第1天，第5天，第9天的同一時(shí)間

2、點(diǎn)添加濃度為1μmol/L ATRA，持續(xù)處理24小時(shí)（即成脂分化誘導(dǎo)第2天，第6天，第10天），收取細(xì)胞樣本。應(yīng)用熒光實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)（real-time quantitative polymerase chain reaction，RT-PCR）檢測(cè)脂肪細(xì)胞形成相關(guān)基因脂肪酸結(jié)合蛋白（fatty acid-binding protein，F(xiàn)ABP）、脂蛋白脂肪酶（lipoprotein lipase，LPL）、脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（C

3、D36）、脂滴包被蛋白（Perilipin）、過(guò)氧化物酶體增殖激活受體-γ2（peroxisome proliferator-activated receptor gamma-2，PPARγ2）以及AP-1家族各成員（Fosl1，F(xiàn)osl2，c-Fos，F(xiàn)osB，c-Jun，JunB，JunD）基因表達(dá)水平。Western blot檢測(cè)蛋白表達(dá)水平。染色質(zhì)免疫共沉淀（chromatin immunoprecipitation，ChIP）

4、檢測(cè)相關(guān)蛋白（RARγ，F(xiàn)osl1）與PPARγ2基因是否存在相互作用。
　　結(jié)果：（1）油紅 O染色結(jié)果顯示，ATRA處理組中細(xì)胞形成的脂滴數(shù)量明顯減少，且油紅染料吸光度OD值明顯下降。（2）BMSCs成脂誘導(dǎo)12天后，RT-PCR結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，1μmol/L ATRA處理組脂肪細(xì)胞形成相關(guān)基因 FABP，LPL，CD36，Perilipin，PPARγ2表達(dá)均顯著降低（PFABP＜0.05，PLPL＜0.001，PC

5、D36＜0.001，PPerilipin＜0.05），P＜0.05差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。（3）RT-PCR檢測(cè)AP-1家族各轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)，F(xiàn)osl1在ATRA處理組成脂誘導(dǎo)第2天，第6天，第10天mRNA表達(dá)水平均顯著升高（P第2天＜0.01，P第6天＜0.01，P第10天＜0.001）。Westren blot結(jié)果顯示，ATRA處理組Fosl1蛋白表達(dá)顯著升高，而PPARγ2蛋白表達(dá)明顯下降。（4）ChIP-qPCR結(jié)果表明，F(xiàn)osl1