TIM信號通路干預對小鼠實驗性結腸炎的作用及機制研究.pdf

1、目的:
　　炎癥性腸?。↖nflammatory Bowel Disease，IBD）是一組病因不明的慢性腸道炎癥性疾病，它包括潰瘍性結腸炎（ Ulcerative Colitis, UC）和克羅恩?。–hron’sdisease, CD），IBD的發(fā)病率逐年上升，已成為一種全球性疾病，預測在未來10年，IBD患者將發(fā)生指數(shù)級增長，中國將擁有超過150萬的IBD患者。BD的病因和發(fā)病機制尚不清楚，腸道細菌及其代謝產(chǎn)物作用于基因易感

2、性宿主使之產(chǎn)生異常的免疫反應在IBD腸道炎癥的起始和持續(xù)發(fā)展中起著重要的作用。
　　目前已明確，Toll樣受體4（Toll-like receptor4, TLR4）信號通路在IBD免疫反應異常中發(fā)揮重要作用，但其具體調(diào)控機制尚未完全闡明。2001年McIntire發(fā)現(xiàn)了新的基因家族Tim（T cell Ig domain and mucin domain）家族，Tim基因家族蛋白對調(diào)控 T細胞的應答起重要作用，是近年來發(fā)現(xiàn)的調(diào)控

3、免疫異常的重要蛋白之一，是調(diào)節(jié)Th免疫反應的核心環(huán)節(jié)，并且與TLRs信號通路有密切關系。Tim-1主要表達在分化成熟的Th2細胞，Tim-4是Tim-1的天然配體，表達于樹突狀細胞（Dendritic cell，DC）表面；與Tim-1相反，Tim-3優(yōu)先表達于活化的 Th1細胞表面，近年來也發(fā)現(xiàn) Tim-3少量表達于巨噬細胞（Macrophage， Mφ）、DC細胞等表面，半乳凝素-9（Galectin-9, Gal-9）是Tim-3

4、配體。因此，除了調(diào)節(jié)Th免疫，由于Tim-4及Tim-3可以表達于固有免疫細胞，而TLRs作為廣泛表達在固有免疫細胞中的受體，Tim蛋白是可以通過調(diào)節(jié)TLRs信號通路而調(diào)節(jié)機體的免疫炎癥反應。目前，Tim相關研究主要集中在風濕免疫性疾病及皮膚移植中，在炎癥性腸病的相關研究較少，Tim蛋白及其配體在 IBD發(fā)生發(fā)展中的作用，與Th免疫反應及TLRs信號通路變化的關系目前尚不清楚。為此，本文通過體內(nèi)研究分別明確Tim-1配體Tim-4及Ti

5、m-3配體Gal-9對不同小鼠實驗性結腸炎模型的腸道炎癥及TLR4信號通路的影響；通過體外研究明確Tim-3在巨噬細胞中的作用，及其對TLRs信號通路的影響；明確不同實驗性結腸炎模型的腸道菌群結構及Gal-9對腸道菌群的影響。旨在探討Tim配體干預在不同結腸炎模型中的作用及其調(diào)控機制，為臨床 IBD的防治尋找有效靶點提供理論與實驗依據(jù)。
　　材料與方法:
　?。ㄒ唬㏕im-1信號通路干預對實驗性結腸炎的作用及機制
　　

6、（1）實驗分組：50只Balb/c鼠隨機分為以下5組（每組10只）：
　　①正常對照組（n=10）
　?、?TNBS模型組（n=10）
　　③ TNBS+Tim-4組（n=10）
　?、?DSS模型組（n=10）
　?、?DSS+Tim-4組（n=10）
　　（2）實驗性結腸炎模型的建立：
　?、?TNBS誘導小鼠實驗性結腸炎模型的建立：6～8周齡的Balb/c小鼠于禁食、不禁飲24小時后，用3

7、.5F導管從肛門插入腸道深約5.5cm，灌注TNBS/50％乙醇溶液100μl，之后將小鼠倒置60秒，于第8天處死小鼠。
　?、?DSS誘導小鼠實驗性結腸炎模型的建立：6～8周齡的Balb/c小鼠自由飲用5%DSS溶液7天，于第8天處死小鼠。
　?。?）Tim-4干預方法：建模第3天開始給予10ug Tim-4/0.4ml PBS腹腔內(nèi)注射，連續(xù)給藥5天；模型對照組小鼠給予0.4ml PBS腹腔注射。
　?。?）各項指

8、標檢測：
　?、俑鹘M小鼠疾病活動指數(shù)DAI的變化
　?、?H&E染色觀察腸黏膜病理學變化及炎癥程度
　?、蹖崟r熒光定量PCR法檢測結腸組織中TLR4、MyD88、Tim-1基因的表達
　?、苊庖呓M化法檢測腸黏膜內(nèi)TLR4、MyD88、NF-κB p65、Tim-1蛋白的表達
　?、?Wes全自動蛋白分析檢測結腸組織中TLR4、MyD88、Tim-1蛋白的表達
　?、薅嘀卮胖槊该夥治龇z測血清中IL-1

9、β、IFN-γ及IL-6的含量
　?。ǘ㏕im-3信號通路干預對實驗性結腸炎的作用及機制
　?。?）實驗分組：50只Balb/c鼠隨機分為以下5組（每組10只）：
　?、僬φ战M（n=10）
　　② TNBS模型組（n=10）
　?、?TNBS+Gal-9組（n=10）
　?、?DSS組（n=10）
　?、?DSS+Gal-9組（n=10）
　　（2）實驗性結腸炎模型的建立：同上

10、>　?。?）Gal-9干預方法：建模第3天開始給予10ugGal-9/0.4ml去離子水腹腔內(nèi)注射，連續(xù)給藥5天；模型對照組小鼠給予0.4ml去離子水腹腔注射。
　?。?）各項指標檢測：
　　RT-PCR檢測Tim-3 mRNA表達
　　IHC及全自動蛋白分析檢測Tim-3蛋白表達量
　　其余同上（不檢測Tim-1）
　　（三）Tim-3干擾對巨噬細胞內(nèi)TLR4/NF-κB信號通路的影響
　?。?）實

11、驗分組：分為以下4組
　?、倏瞻讓φ战M：RAW264.7細胞
　?、?Tim-3干擾對照組：shRNA干擾Tim-3的RAW264.7細胞
　?、?LPS刺激組：RAW264.7細胞+LPS刺激
　　④ Tim-3干擾LPS刺激組：shRNA干擾Tim-3的RAW264.7細胞+LPS刺激根據(jù)以上分組，給予終濃度為100ng/ml的LPS作用24h（獨立重復試驗3次）。
　　（2）檢測指標：
　　We

12、s全自動蛋白分析檢測細胞Tim-3、TLR4、MyD88、pNF-κB p65蛋白表達
　?。ㄋ模┬∈髮嶒炐越Y腸炎腸道菌群結構的變化及Gal-9的干預影響
　?。?）實驗分組：同第（二）部分
　?。?）收集各小鼠的新鮮糞便樣品，采用QIAamp DNA分離試劑盒提取細菌基因組DNA
　?。?）將收集的DNA樣本送檢華大基因有限公司，擴增目標16S rRNA片段，混樣、純化、建庫后上機，基于Illumina Mis

13、eq高通量測序平臺對V4可變區(qū)進行雙末端測序，應用生物信息學方法分析腸道菌群結構的變化。
　　結果：
　?。ㄒ唬?Tim-1信號通路干預對實驗性結腸炎的作用及機制
　　1．Tim-4干預對實驗性結腸炎DAI的影響
　　TNBS及DSS模型組小鼠DAI均顯著高于正常組（P＜0.01），給予Tim-4干預后，TNBS及 DSS模型組 DAI仍顯著高于正常組（P＜0.05，P＜0.01），TNBS+Tim-4組 DAI

14、有改善，但與未干預組差異無統(tǒng)計學意義（p＞0.05）；而DSS+Tim-4組 DAI有上升趨勢，與未干預組差異亦無統(tǒng)計學意義（p＞0.05）。
　　2．Tim-4干預對實驗性結腸炎腸黏膜組織病理學及炎癥程度的影響
　　TNBS模型組小鼠的結腸炎癥程度、病變深度、隱窩破壞均顯著高于正常對照組（P＜0.01）。Tim-4干預后，小鼠病理組織學評分均有改善，隱窩破壞與正常組無顯著差異（p＞0.05），但炎癥程度及病變深度仍顯著高于

15、正常組（P＜0.01， P＜0.05），炎癥程度評分顯著低于未干預組（P＜0.05）。無論有無Tim-4干預， DSS組小鼠結腸炎癥程度、病變深度、隱窩破壞均顯著高于正常對照組（P＜0.01）；Tim-4干預后，病理組織學評分均有加重，但與未干預組比較差異無統(tǒng)計學意義（p＞0.05）。
　　3．Tim-4干預對結腸黏膜內(nèi)TLR4/NF-κB信號通路的影響
　?。?） Tim-4干預對結腸黏膜組織Tim-1表達的影響
　

16、　RT-PCR結果顯示：與正常對照組相比，TNBS小鼠腸黏膜組織的 Tim-1 mRNA表達上調(diào)，但差異無統(tǒng)計學意義（p＞0.05）；DSS模型組小鼠腸黏膜組織的Tim-1 mRNA表達顯著高于正常對照組（P＜0.01）。給予Tim-4干預處理后， TNBS組和DSS組Tim-1 mRNA表達升高，與正常組比較有顯著差異（P＜0.01）；兩模型組藥物干預前后的mRNA表達差異無統(tǒng)計學意義（p＞0.05）。
　　IHC結果顯示：在炎

17、細胞中，TNBS組及DSS組Tim-1表達均高于正常對照組，其中DSS組與正常對照組差異顯著（P＜0.01）。Tim-4干預后，TNBS組Tim-1表達升高，而DSS組Tim-1蛋白表達下降，均顯著高于正常對照組（P＜0.05， P＜0.01）；與Tim-4未干預組均有差異，差異無統(tǒng)計學意義。
　　Wes蛋白分析結果顯示：無論是TNBS模型還是DSS模型組，小鼠腸粘膜組織的Tim-1均高表達，顯著高于正常對照組（P＜0.01）；T

18、im-4干預后，TNBS模型組中Tim-1表達稍增高，而DSS組Tim-1下降明顯，與未干預組有明顯差異（P＜0.01），而與正常對照組無統(tǒng)計學差異（p＞0.05）。
　　（2） Tim-4干預對結腸黏膜組織TLR4表達的影響
　　RT-PCR結果顯示：TNBS及DSS模型組小鼠腸黏膜組織的TLR4 mRNA表達均顯著高于正常對照組（P＜0.05，P＜0.01）。給予Tim-4干預處理后，TNBS模型組TLR4表達下調(diào)，且與

19、正常對照組比較無顯著差異（p＞0.05）；DSS模型組TLR4表達仍有上調(diào)趨勢，與正常對照組比較有顯著差異（P＜0.01）；但兩模型組藥物干預前后mRNA表達的差異無統(tǒng)計學意義（p＞0.05）。
　　IHC結果顯示：無論有無 Tim-4干預，在腺細胞和炎細胞中，TNBS組及DSS組TLR4表達均顯著高于正常對照組（P＜0.01）。Tim-4干預后，TNBS組TLR4表達下降，顯著低于未干預組（P＜0.05），而在DSS組TLR4蛋

20、白表達仍有上升趨勢，但與未干預組比較差異無統(tǒng)計學意義（p＞0.05）。
　　Wes蛋白分析結果顯示：與正常對照組相比，TNBS模型組及 DSS模型組結腸黏膜組織TLR4蛋白表達均顯著升高（P＜0.05，P＜0.01）。給予Tim-4干預后，TNBS組TLR4表達下調(diào)，與未干預組有顯著差異（P＜0.01），而與正常對照組無顯著差異（p＞0.05）；DSS組TLR4上調(diào)明顯，與正常對照組有顯著差異（P＜0.01），而與未干預組差異無統(tǒng)

21、計學意義（p＞0.05）。
　?。?） Tim-4干預對結腸黏膜組織MyD88表達的影響
　　RT-PCR結果顯示：TNBS及DSS模型組小鼠腸黏膜組織的MyD88 mRNA表達均顯著高于正常對照組（P＜0.01）。Tim-4干預后，TNBS組MyD88表達下調(diào)，顯著低于未干預組（P＜0.05），且與正常對照組比較無顯著差異（p＞0.05）；DSS模型組MyD88表達增加，顯著高于未干預組（P＜0.01），與正常對照組比較有

22、顯著差異（P＜0.01）。
　　IHC結果顯示：無論有無 Tim-4干預，在腺細胞和炎細胞中，TNBS組及DSS組 MyD88表達均顯著高于正常對照組（P＜0.01）。Tim-4干預后，TNBS組MyD88表達下降，顯著低于未干預組（P＜0.05），而DSS組MyD88蛋白表達仍有上升趨勢，但與未干預組比較差異無統(tǒng)計學意義（p＞0.05）。
　　Wes蛋白分析結果顯示：與正常對照組相比，TNBS模型組結腸黏膜組織MyD88蛋

23、白表達顯著升高（P＜0.01）；給予Tim-4干預后，TLR4表達下調(diào)，但與未干預組無顯著差異（p＞0.05）。與正常對照組相比，DSS模型組結腸黏膜組織MyD88蛋白表達升高（p＞0.05），但給予Tim-4干預后，MyD88上調(diào)明顯，與正常對照組有顯著差異（P＜0.05）。兩組模型中，Tim-4干預前后差異無統(tǒng)計學意義（p＞0.05）.
　?。?） Tim-4干預對結腸黏膜組織NF-κB p65表達的影響：
　　IHC結

24、果顯示：無論有無 Tim-4干預，在腺細胞和炎細胞中，TNBS組及DSS組NF-κBp65表達均顯著高于正常對照組（P＜0.01）。Tim-4干預后，TNBS組NF-κBp65表達下降，顯著低于未干預組（P＜0.05），而DSS組NF-κBp65蛋白表達仍有上升趨勢，但與未干預組比較差異無統(tǒng)計學意義（p＞0.05）
　　4．Tim-4干預對細胞因子釋放的影響
　　與正常對照組相比，TNBS模型及DSS模型小鼠血清中IFN-γ

25、、IL-6、IL-1β的釋放均有不同程度的增加；Tim-4干預后，TNBS組細胞因子釋放減少明顯，其中IFN-γ的釋放水平下調(diào)顯著（P＜0.01, P＜0.05），而DSS組細胞因子釋放較干預前有增加趨勢（p＞0.05）。
　?。ǘ㏕im-3信號通路干預對實驗性結腸炎的作用及機制
　　1．Gal-9干預對實驗性結腸炎DAI的影響
　　TNBS及DSS模型組小鼠DAI均顯著高于正常對照組（P＜0.05，P＜0.01），

26、給予Gal-9干預后，TNBS及DSS模型組DAI仍顯著高于正常組（P＜0.05，P＜0.01）， TNBS+Gal-9組 DAI有改善，且第5天 DAI與未干預組差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；而DSS+Gal-9組DAI有上升趨勢，與未干預組差異無統(tǒng)計學意義（p＞0.05）。
　　2．Gal-9干預對實驗性結腸炎腸黏膜組織病理學及炎癥程度的影響
　　TNBS模型組小鼠的結腸炎癥程度、病變深度、隱窩破壞均顯著高于正常對照

27、組（P＜0.01）。Gal-9干預后，小鼠病理組織學評分均有改善，隱窩破壞與正常組無顯著差異（p＞0.05），但炎癥程度及病變深度仍顯著高于正常組（P＜0.01），與未干預組相比，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05，P＜0.01）。無論有無Gal-9干預， DSS組小鼠結腸炎癥程度、病變深度、隱窩破壞均顯著高于正常對照組（P＜0.01）；Gal-9干預后，病理組織學評分均有加重，但與未干預組比較差異無統(tǒng)計學意義（p＞0.05）。
　　

28、3．Gal-9干預對結腸黏膜內(nèi)TLR4/NF-κB信號通路的影響
　?。?）Gal-9干預對結腸黏膜組織Tim-3表達的影響
　　RT-PCR結果顯示：與正常對照組相比，TNBS小鼠腸黏膜組織的 Tim-3 mRNA表達下調(diào)，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；DSS模型組小鼠腸黏膜組織的Tim-3 mRNA表達與正常對照組無顯著差異（p＞0.05）。給予Gal-9干預處理后，TNBS組和DSS組Tim-3 mRNA表達均升高

29、，與正常對照組比較有顯著差異（P＜0.05，P＜0.01）；TNBS模型組干預前后的Tim-3 mRNA表達差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。
　　IHC結果顯示：在炎細胞中，TNBS組及DSS組Tim-3表達均低正常對照組，其中TNBS組與正常對照組差異顯著（P＜0.01）。Gal-9干預后，TNBS組及DSS組Tim-3表達均升高，DSS組顯著高于正常對照組（P＜0.01）；與Gal-9未干預組均有差異，且差異有統(tǒng)計學意義（P

30、＜0.01）。
　　Wes蛋白分析結果顯示：TNBS模型組中結腸粘膜的Tim-3表達下降，給予Gal-9干預后，Tim-3上調(diào)，組間有顯著差異（P＜0.05）；DSS組的Tim-3表達無明顯變化，給予Gal-9干預后上調(diào)明顯，與正常對照組有顯著差異（P＜0.05）。
　?。?）Gal-9干預對結腸黏膜組織TLR4表達的影響
　　RT-PCR結果顯示：TNBS及DSS模型組小鼠腸黏膜組織的TLR4 mRNA表達均顯著高于

31、正常對照組（P＜0.05）。給予 Gal-9干預后，TNBS模型組 TLR4表達下調(diào)，且與正常對照組比較無顯著差異（p＞0.05）；DSS模型組TLR4表達仍有上調(diào)趨勢，與正常對照組比較有顯著差異（P＜0.01）；TNBS模型組藥物干預前后mRNA表達的差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　IHC結果顯示：無論有無 Gal-9干預，在腺細胞和炎細胞中，TNBS組及DSS組TLR4表達均顯著高于正常對照組（P＜0.01）。Gal-

32、9干預后，TNBS組TLR4表達下降，顯著低于未干預組（P＜0.01），而在DSS組TLR4蛋白表達仍有上升趨勢，但與未干預組比較差異無統(tǒng)計學意義（p＞0.05）。
　　Wes蛋白分析結果顯示：與正常組相比，TNBS及 DSS模型組結腸黏膜組織的TLR4蛋白表達均明顯上調(diào)（P＜0.01, P＜0.05）；給予Gal-9干預處理后，TNBS組TLR4下調(diào)，而DSS組TLR4表達上調(diào)，與正常對照組有顯著差異（P＜0.01），但干預前后

33、組間無明顯差異。
　?。?）Gal-9干預對結腸黏膜組織MyD88表達的影響
　　RT-PCR結果顯示：TNBS及DSS模型組小鼠腸黏膜組織的MyD88 mRNA表達均顯著高于正常對照組（P＜0.05，P＜0.01）。Gal-9干預后，TNBS組MyD88表達下調(diào)，與正常對照組比較無顯著差異（p＞0.05），干預前后差異無統(tǒng)計學意義（p＞0.05）；DSS模型組MyD88表達增加，顯著高于正常對照組（P＜0.01），干預前后

34、差異無統(tǒng)計學意義（p＞0.05）。
　　IHC結果顯示：無論有無 Gal-9干預，在腺細胞和炎細胞中，TNBS組及DSS組MyD88表達均顯著高于正常對照組（P＜0.01）。Gal-9干預后，TNBS組MyD88表達下降，顯著低于未干預組（P＜0.05），而DSS組MyD88蛋白表達仍有上升趨勢，但與未干預組比較差異無統(tǒng)計學意義（p＞0.05）
　　Wes蛋白分析結果顯示： TNBS及DSS模型組結腸黏膜MyD88蛋白表達均

35、明顯上調(diào)（P＜0.05）；給予Gal-9干預處理后，TNBS組MyD88下調(diào)，干預前后組間有明顯差異（P＜0.05）。DSS模型組MyD88蛋白在Gal-9干預后上調(diào)明顯，與正常對照組有顯著差異（P＜0.05）。
　　（4） Gal-9干預對結腸黏膜組織NF-κB p65表達的影響：
　　IHC結果顯示：無論有無 Gal-9干預，在腺細胞和炎細胞中，TNBS組及DSS組NF-κBp65表達均顯著高于正常對照組（P＜0.01）

36、。Gal-9干預后，TNBS組NF-κBp65表達下降，顯著低于未干預組（P＜0.01），而DSS組NF-κBp65蛋白表達仍有上升趨勢，但與未干預組比較差異無統(tǒng)計學意義（p＞0.05）。
　　4．Gal-9干預對細胞因子釋放的影響
　　與正常對照組相比，TNBS及DSS模型小鼠血清中IFN-γ、IL-1β、IL-6的釋放有不同程度的增加。與未干預組相比，TNBS模型中細胞因子的釋放減少明顯，而DSS模型中細胞因子釋放有增加

37、，且IL-6升高明顯（P＜0.01）。
　?。ㄈ㏕im-3干擾對鼠源性巨噬細胞內(nèi)TLR4信號通路的影響
　　1．LPS對巨噬細胞內(nèi)TLR4、MyD88 mRNA表達的影響
　　給予LPS刺激后，可見小鼠RAW264.7細胞的TLR4及MyD88mRNA有不同程度的升高，因此，LPS刺激可以激活巨噬細胞內(nèi)TLR4信號通路，根據(jù)實驗結果，以100ng/ml LPS作用24h進行TLR4/NF-κB信號通路的蛋白檢測。

38、r>　　2．shRNA干擾Tim-3對巨噬細胞內(nèi)TLR4/NF-κB信號通路的影響
　　在LPS作用下，野生型巨噬細胞內(nèi)TLR4、MyD88及pNF-κBp65蛋白表達在給藥后升高（P＜0.05）；shRNA干擾的巨噬細胞內(nèi)TLR4及pNF-κBp65蛋白表達在給藥后顯著升高（P＜0.01），MyD88蛋白表達在給藥后稍升高（p＞0.05）。
　　在無LPS作用下，shRNA干擾組與野生型巨噬細胞組間TLR4、MyD88及p

39、NF-κBp65表達無顯著性差異（p＞0.05）；在LPS作用下，shRNA干擾組TLR4及pNF-κBp65蛋白的表達顯著高于野生型巨噬細胞（P＜0.01），MyD88升高，但組間比較無差異（p＞0.05）；另外，在LPS作用下，野生型巨噬細胞內(nèi)Tim-3蛋白表達在LPS刺激后明顯降低（P＜0.01）。
　　（四）實驗性結腸炎腸道菌群的變化及Gal-9的干預影響
　　1．實驗性結腸炎小鼠腸道菌群結構的變化
　　TNB

40、S及DSS模型小鼠的腸道菌群均較正常組有變化。PCoA分析方法顯示正常對照組小鼠與兩組模型組腸道菌群結構存在顯著差異（ PC1貢獻度為24.59%，PC2貢獻度為11.55%）。與正常對照組相比，TNBS及DSS模型組小鼠腸道菌群多樣性指數(shù)中chao指數(shù)和shannon指數(shù)顯著下降而simpon指數(shù)升高，Alpha多樣性盒形圖顯示TNBS及DSS模型與正常組有差異，以DSS模型組差異更為顯著。在門的水平上，DSS模型組較對照組腸道菌群中

41、厚壁菌門減少，而TNBS模型組較對照組升高；且DSS組脫鐵桿菌門的平均豐度明顯高于正常組（P＜0.01）。在屬的水平上，與正常組比較，TNBS組的沃氏嗜膽菌屬（Bilophila）、Butyricimonas及Paraprevotella的相對豐度低于正常組，而瘤胃球菌屬（Ruminococcus）、產(chǎn)堿菌屬（Coprococcus）的相對豐度高于正常組。DSS組的Parabacteroides、沃氏嗜膽菌屬（Bilophila）、Bu

42、tyricimonas、厭氧支原體屬（Anaeroplasma）的相對豐度低于正常組，而擬桿菌屬（Bacteroides）、Mucispirillum、螺桿菌屬（Helicobacter）、及Paraprevotella高于正常組。提示小鼠實驗性結腸炎有不同的腸道菌群改變，且不同的腸道炎癥模型的菌群改變有不同。其中，胃球菌屬（Ruminococcus）增加是CD患者較特異的菌群失調(diào)改變。
　　2．Gal-9對實驗性結腸炎小鼠腸道菌

43、群結構的影響
　　給予Gal-9干預后，TNBS及DSS模型小鼠腸道菌群的多樣性指數(shù)異常有改善，其中chao指數(shù)和shannon指數(shù)有升高，而simpson指數(shù)有下降。在門水平，用藥前后兩組細菌豐度無明顯差異（p＞0.05）；而在屬水平差異有顯現(xiàn)，給予Gal-9干預后的TNBS模型中，Odoribacter的相對豐度高于未給藥組（1.98%vs0.51%, P＜0.05）；給予Gal-9干預后的DSS造模中的顫螺旋菌屬（Oscil

44、lospira）的相對豐度高于未給藥組（6.42%vs4.04%）。
　　1. Tim-1配體Tim-4和Tim-3配體Gal-9干預，可影響小鼠實驗性結腸炎的腸道炎癥和病情嚴重程度，且對不同結腸炎模型的作用不同。
　　2. Tim-1配體Tim-4和Tim-3配體Gal-9，可調(diào)節(jié)小鼠實驗性結腸炎腸黏膜內(nèi)TLR4/NF-κB信號通路，且對不同結腸炎模型的調(diào)控作用不同；這可能是其影響小鼠實驗性結腸炎的腸道炎癥和病情嚴重程度的