紅景天和麝香保心丸對(duì)兔動(dòng)脈粥樣斑塊穩(wěn)定性的影響及機(jī)制研究.pdf

1、目的：1、通過(guò)高脂飼料喂養(yǎng)和球囊擴(kuò)張術(shù)建立兔股動(dòng)脈粥樣硬化模型，了解以此建立模型的大體形態(tài)，以及顯微鏡下的細(xì)胞組成情況。2、研究具有促進(jìn)血管生成作用的中藥麝香保心丸、紅景天和調(diào)脂藥物辛伐他汀(作為陽(yáng)性對(duì)照藥物)干預(yù)對(duì)于兔股動(dòng)脈粥樣硬化斑塊內(nèi)新生血管、細(xì)胞外基質(zhì)代謝、炎癥反應(yīng)以及血脂水平的影響。3、比較紅景天水煎劑和紅景天苷懸濁液在相同紅景天苷濃度下對(duì)兔股動(dòng)脈粥樣斑塊內(nèi)新生血管、細(xì)胞外基質(zhì)代謝、炎癥反應(yīng)以及血脂水平的影響。通過(guò)研究?jī)烧叩乃?/p>

2、效在本模型上的差異，為中草藥紅景天應(yīng)用的定量化和標(biāo)準(zhǔn)化探索途徑。 方法：1、動(dòng)物造模：50只健康雄性新西蘭兔以高脂飼料喂養(yǎng)2周后，行球囊擴(kuò)張術(shù)損傷股動(dòng)脈內(nèi)膜建立動(dòng)脈粥樣硬化模型。2、實(shí)驗(yàn)分組和給藥方法：將動(dòng)物隨機(jī)分為對(duì)照組(10只)、紅景天組(10只)、紅景天苷組(10只)、麝香保心丸組(10只)和辛伐他汀組(10只)。繼續(xù)喂養(yǎng)高脂飼料4周。干預(yù)組同時(shí)給予藥物灌胃4周。紅景天制成水煎劑(濃度為0．5g／m1)，灌胃劑量為lml／

3、kg每天；測(cè)定紅景天水煎劑中紅景天苷含量為0．173mg/g，將1％的紅景天苷干粉與蒸餾水配成紅景天苷濃度同樣為0．173mg／g的懸濁液，灌胃劑量也是1ml／kg每天；麝香保心丸給藥劑量為一粒(22．5mg)每只每天；辛伐他汀碾碎后配成懸濁液，灌胃劑量是2．5mg／kg每天。3、血脂測(cè)定，分別于實(shí)驗(yàn)第1周、第3周以及第7周處死前采血。采血前禁食；選擇耳緣靜脈采血。測(cè)定血清總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白和高密度脂蛋白。4、實(shí)驗(yàn)第7周采

4、用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測(cè)定血清基質(zhì)金屬蛋白酶．3(MMP-3)、血清白介素6(IL-6)和血清超敏C反應(yīng)蛋白(hsCRP)。5、用病理學(xué)染色和免疫組化染色定量兔股動(dòng)脈粥樣硬化斑塊中CD34、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)、MMP-3、膠原、增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)、單核細(xì)胞趨化蛋白．1(MCP．1)、糜酶(chymase)和α平滑肌肌動(dòng)蛋白(αSMA)的陽(yáng)性面積。6、以實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)各組粥樣斑塊中的VEGFmRNA含量。7、

5、檢測(cè)結(jié)果用x±S表示，各組間差異比較用單因素方差分析中的多重比較q檢驗(yàn)。SPSSl0．0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。 結(jié)果：1一般情況和粥樣斑塊模型的大體觀察整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中共死亡兔子10只。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)動(dòng)物數(shù)目為：對(duì)照組8只，麝香保心丸組8只，紅景天組6只，紅景天苷組9只，辛伐他汀組9只。可見(jiàn)股動(dòng)脈球囊擴(kuò)張?zhí)幱休^大的灰白色斑塊形成；光鏡下看到斑塊包含泡沫細(xì)胞、膽固醇結(jié)晶、平滑肌細(xì)胞和膠原組織等人類(lèi)粥樣斑塊主要成分。2斑塊內(nèi)新生血管情況所有藥

6、物干預(yù)組的新生血管面積(用CD34陽(yáng)性染色面積表示)都比對(duì)照組顯著減少(辛伐他汀組vs對(duì)照組：15．24±3．34％vs20．39±5．96％，P<0．01；紅景天組vs對(duì)照組：10．99±3．59％vs20．39±5．96％，P<0．01；麝香保心丸組vs對(duì)照組：13．85±2．97％vs20．39±5．96％，P<0．01)；紅景天苷也有類(lèi)似的作用(13．28±4．01％vs20．39±5．96％，P<0．01)，與紅景天組比較無(wú)顯

7、著性差異。同樣藥物干預(yù)組的VEGF陽(yáng)性面積比對(duì)照組明顯減少(辛伐他汀組vs對(duì)照組：13．35±7．27％vs20．M±6．15％，P<0．01；紅景天組vs對(duì)照組：11．43±3．41％vs20．14±6．15％，P<0．01；麝香保心丸組vs對(duì)照組：15．23±2．93％vs20．14±6．15％，P<0．01)，并以紅景天組減少最為顯著。紅景天苷也相仿(13．59±4．74％vs20．14±6．15％，P<0．01)，與紅景天組比較

8、沒(méi)有顯著差別。兩個(gè)中藥干預(yù)組斑塊內(nèi)VEGF的mRNA拷貝數(shù)不比對(duì)照組減少(紅景天組vs對(duì)照組：1．38×10-2vs6．07×10-3；麝香保心丸組vs對(duì)照組：2．00×10-2vs6．07×10-3)。3斑塊內(nèi)細(xì)胞外基質(zhì)代謝情況藥物干預(yù)組的膠原面積都比對(duì)照組顯著減少(辛伐他汀組vs對(duì)照組：12．54±2．82％vs20．02±6．11％，P<0．01；紅景天組vs對(duì)照組：16．99±6．00％vs20．02±6．11％，P<0．05：

9、麝香保心丸組vs對(duì)照組：11．35±1．87％vs20．02±6．11％，P<0．01)，其中又以麝香保心丸組下降最為明顯；紅景天苷也有降低膠原作用(15．65±1．97％vs20．02±6．11，P<0．01)，與紅景天組差別無(wú)顯著性。辛伐他汀組和麝香保心丸組粥樣斑塊的α平滑肌肌動(dòng)蛋白抗體陽(yáng)性面積都與對(duì)照組相仿；而紅景天組則顯著減少(紅景天組vs對(duì)照組：10．34±1．62％vsM．44±2．76％，P<0．01)；紅景天苷也有降低作

10、用(11．94±2．84％vs14．44±2．76％，P<0．01)；但該組降低程度不如紅景天組，這種差別具有顯著性(P<0．05)。辛伐他汀組和紅景天苷組的斑塊內(nèi)的PCNA陽(yáng)性面積比對(duì)照組明顯減少(辛伐他汀組vs對(duì)照組：8．86±5．60％vs15．07±5．66％，P<0．01；紅景天苷組9．42±4．16％vs15．07±5．66％，P<0．01)；紅景天苷組和紅景天組比較有顯著性差異(P<0．05)。各藥物干預(yù)組斑塊內(nèi)的MMP-

11、3陽(yáng)性面積都比對(duì)照組明顯減少(辛伐他汀組vs對(duì)照組：11．24±2．81％vs16．30±5．96％，P<0．01；紅景天組vs對(duì)照組：11．89±4．29％vs16．30±5．96％，P<0．01；麝香保心丸組vs對(duì)照組：11．52±4．97％vs16．30±5．96％，P<0．01；紅景天苷組vs對(duì)照組10．51±2．34％vs16．30±5．96％，P<0．01)；紅景天組和紅景天苷組比較沒(méi)有顯著性差別。有兩種藥物能顯著下降血清M

12、MP-3水平(辛伐他汀組vs對(duì)照組：8．38±19．44mg／Lvs21．01±17．22mg／L，P<0．01；紅景天組vs對(duì)照組：12．43±9．32mg／Lvs21．01±17．22唱／L，P<0．05)。紅景天苷組和紅景天組比較有顯著性差別(P<0．05)。4與斑塊炎癥相關(guān)的指標(biāo)除了紅景天苷(8．05±4．14％vs12．21±2．59％，P<0．01)外，其他藥物降低斑塊內(nèi)MCP-1的作用都不顯著；紅景天苷與紅景天組比較有顯著

13、性差異(MCP-1，P<0．01)。所有藥物都能減少斑塊內(nèi)的chymase陽(yáng)性面積(辛伐他汀組vs對(duì)照組：9．74±2．11％vs12．53±2．78％，P<0．01；紅景天組vs對(duì)照組：9．13±1．95％vs12．53±2．78％，P<0．01；麝香保心丸vs對(duì)照組：6．23±3．71％vs12．53±2．78％，P<0．01；紅景天苷組vs對(duì)照組：5．57±2．13％vs12．53±2．78％，P<0．01)；紅景天苷組與紅景天組

14、比較差別達(dá)到顯著性(P<0．01)。所有藥物都沒(méi)有顯著降低血IL一6和CRP的水平。5血脂除辛伐他汀能顯著降低血清總膽固醇、LDL-C和甘油三酯外，麝香保心丸和紅景天都能顯著降低血清LDL-C水平(麝香保心丸組vs對(duì)照組：6．19±14．34mmol／Lvs12．88±9．82mmol／L，P<0．01；紅景天組vs對(duì)照組8．87±4．00mmol／Lvs12．88±9．82mmol／L，P<0．05)，紅景天還可以顯著降低血清總膽固醇

15、(10．11±3．59mmol／Lvs20．32±6．33mmol／L，P<0．01)；兩種中藥對(duì)甘油三酯都無(wú)降低作用。紅景天苷對(duì)血脂的影響沒(méi)有達(dá)到顯著性，該組的血清總膽固醇水平與紅景天組比較有顯著性差異(19．34±11．44vs10．11±3．59mmol／L，P<0．01)。 結(jié)論： 1、采用高脂飼料喂養(yǎng)結(jié)合球囊擴(kuò)張術(shù)建立的動(dòng)脈粥樣硬化模型，包含人類(lèi)粥樣斑塊的基本組成。 2、紅景天和麝香保心丸都能減少粥樣斑

16、塊內(nèi)血管新生，這種作用可能和促進(jìn)斑塊內(nèi)VEGF的分解有關(guān)；抑制血管新生的部分直接機(jī)制是抑制肥大細(xì)胞的活性，部分間接機(jī)制是對(duì)斑塊內(nèi)基質(zhì)的影響如減少斑塊內(nèi)MMP-3和抑制平滑肌增殖和轉(zhuǎn)化。兩種中藥減少斑塊內(nèi)MMP-3的作用有利于斑塊的穩(wěn)定，機(jī)制包括抑制平滑肌增殖以及轉(zhuǎn)化、抑制chymase活性和降低血清LDL-C等。兩種中藥對(duì)粥樣斑塊內(nèi)膠原和MMP-3含量的凈效應(yīng)與降低血清LDL-C有關(guān)；對(duì)于斑塊內(nèi)平滑肌細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)化，MCP．1含量以及

17、肥大細(xì)胞活性的影響似乎有降低LDL-C以外的其他機(jī)制參與。 3、紅景天主要通過(guò)紅景天苷對(duì)粥樣斑塊發(fā)生的作用有：減少粥樣斑塊內(nèi)新生血管和VEGF含量，抑制斑塊內(nèi)膠原生成和MMP-3活性，以及下降血清LDL-C。兩種藥物有差異的作用包括：對(duì)平滑肌增殖和轉(zhuǎn)化的影響，對(duì)MCP0的作用，對(duì)肥大細(xì)胞以及chymase的作用，還有下降血清VLDL-C的作用。產(chǎn)生這些差異的原因，考慮一是紅景天含有其他與紅景天苷藥理作用不同的組成(尤其是顯著下降