血管毀損術(shù)對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊內(nèi)新生血管及斑塊穩(wěn)定性影響的研究.pdf

1、實(shí)驗(yàn)背景及目的：
　　動(dòng)脈粥樣硬化(AS)發(fā)病率呈逐漸上升趨勢(shì)，是影響人類健康的主要疾病之一。動(dòng)脈粥樣硬化中以動(dòng)脈粥樣斑塊形成為典型特征。其中易損斑塊的破裂所引發(fā)的血小板聚集、血栓形成，繼而使冠狀動(dòng)脈部分或完全堵塞，導(dǎo)致一系列的心肌缺血或梗死癥狀是臨床上常見的導(dǎo)致猝死的心血管意外之一。
　　易損斑塊的特征主要包括薄的纖維帽、大的脂質(zhì)核、斑塊內(nèi)新生血管形成和大量炎癥細(xì)胞的積聚等。斑塊內(nèi)的新生血管是導(dǎo)致易損性斑塊破裂的因素之一，

2、深入研究斑塊內(nèi)新生血管與易損斑塊穩(wěn)定性的關(guān)系需要一個(gè)理想的動(dòng)脈粥樣硬化動(dòng)物模型。目前對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化動(dòng)物模型的建立并無公認(rèn)的金標(biāo)準(zhǔn)，所采用的模型主要為高脂飲食加球囊拉傷致家兔動(dòng)脈粥樣硬化斑塊模型，和高脂喂養(yǎng)加頸動(dòng)脈套管術(shù)所致ApoE基因敲除小鼠動(dòng)脈粥樣硬化斑塊模型。本實(shí)驗(yàn)中，我們?cè)趥鹘y(tǒng)高脂飲食加球囊拉傷所致動(dòng)脈粥樣硬化兔模型的基礎(chǔ)上，增加干預(yù)因素，采用間斷、反復(fù)吸煙的方法，以促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形成及易損性的增加。利用超聲造影檢測(cè)新生血

3、管的指標(biāo)來評(píng)價(jià)所建模型的易損性。以期建立斑塊易損性更高的動(dòng)脈粥樣硬化斑塊模型。
　　血管毀損術(shù)是利用超聲的空化效應(yīng)所產(chǎn)生的機(jī)械性剪切撕裂、沖擊波和微射流等作用損傷血管管壁，激活外源性或內(nèi)源性的凝血機(jī)制，以誘發(fā)大面積毛細(xì)血管損傷、破壞或是栓塞，達(dá)到破壞血管的目的。目前，這種技術(shù)多應(yīng)用于腫瘤血管的定向毀損研究。
　　本實(shí)驗(yàn)中，嘗試采用血管毀損術(shù)靶向破壞斑塊內(nèi)的新生血管，采用超聲造影技術(shù)于術(shù)前、術(shù)后分別觀察斑塊內(nèi)新生血管的造影劑灌

4、注情況，以確定新生血管是否破裂或阻塞。本研究將新生血管作為評(píng)價(jià)斑塊易損性的一個(gè)敏感指標(biāo)，用超聲造影直觀顯示斑塊內(nèi)新生血管的存在及分布情況，利用血管毀損術(shù)使斑塊內(nèi)新生血管破裂栓塞，研究其對(duì)斑塊穩(wěn)定性的影響。
　　實(shí)驗(yàn)方法：
　　第一部分：建立吸煙誘導(dǎo)的兔動(dòng)脈粥樣硬化斑塊模型：
　　在高脂喂養(yǎng)加球囊損傷血管內(nèi)皮術(shù)基礎(chǔ)上增加吸煙。方法如下：每日被動(dòng)吸煙2次，每次1小時(shí)，共吸煙8支。喂養(yǎng)總時(shí)長(zhǎng)為20周。實(shí)驗(yàn)終點(diǎn)前檢測(cè)血脂三項(xiàng)、

5、TG、TC、LDL、ox-LDL、hs-CRP、IL-8，實(shí)驗(yàn)前及實(shí)驗(yàn)第8、14、20周進(jìn)行超聲觀察內(nèi)膜增厚情況和斑塊形成情況，超聲造影檢測(cè)斑塊內(nèi)新生血管形成情況，處死動(dòng)物后取標(biāo)本進(jìn)行HE、油紅O、天狼星紅染色，觀察吸煙干預(yù)后斑塊大小、形態(tài)和組織成分的改變。用抗兔巨噬細(xì)胞抗體進(jìn)行免疫組化染色觀察吸煙組斑塊中巨噬細(xì)胞含量是否改變。
　　第二部分：血管毀損術(shù)對(duì)斑塊穩(wěn)定性影響的初步研究：
　　選用實(shí)驗(yàn)第一部分中建立的兔動(dòng)脈粥樣硬化

6、斑塊模型，分別于血管毀損術(shù)前、后進(jìn)行超聲造影檢測(cè)，觀察斑塊內(nèi)新生血管數(shù)量和分布情況。對(duì)局部斑塊行血管毀損術(shù)并觀察血管受損情況，CD31抗體免疫組化染色對(duì)比新生血管數(shù)量。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
　　1.成功建立吸煙干預(yù)的兔動(dòng)脈粥樣硬化模型。與單純高脂喂養(yǎng)加球囊損傷組相比，發(fā)現(xiàn)經(jīng)過吸煙干預(yù)后，ox-LDL(P<0.05 vs.高脂加球囊組)、hs-CRP(P<0.05 vs.高脂加球囊組)、IL-8(P<0.05 vs.高脂加球囊組)

7、明顯升高， TG(P>0.05 vs.高脂加球囊組)、TC(P>0.05 vs.高脂加球囊組)、LDL(P>0.05 vs.高脂加球囊組)無明顯改變。HE染色可見吸煙組斑塊脂質(zhì)核心更大，斑塊纖維帽更薄。油紅O染色可見吸煙組泡沫細(xì)胞增多，巨噬細(xì)胞免疫組化染色可見吸煙組巨噬細(xì)胞變多(P<0.05 vs.高脂加球囊組)。超聲結(jié)果顯示內(nèi)膜增厚更明顯，斑塊形成也更為顯著。超聲造影顯示吸煙干預(yù)后斑塊內(nèi)新生血管明顯增多(P<0.05 vs.高脂加球囊

8、組)。
　　2.超聲造影可準(zhǔn)確檢測(cè)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的面積及斑塊內(nèi)新生血管分布情況。局部斑塊行血管毀損術(shù)后，造影顯示斑塊內(nèi)新生血管灌注量明顯降低，部分斑塊內(nèi)未見新生血管灌注，未行血管毀損術(shù)的斑塊和對(duì)照組均在斑塊內(nèi)見條索樣造影灌注。CD31抗體免疫組化染色顯示，術(shù)后斑塊內(nèi)新生血管明較對(duì)照組顯減少。
　　結(jié)論：
　　1.高脂喂養(yǎng)加球囊拉傷術(shù)損傷血管內(nèi)皮可造成家兔腹主動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成。
　　2.吸煙干預(yù)可以加劇動(dòng)脈粥