何首烏總苷對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性的影響及可能機(jī)制.pdf

1、急性冠脈綜合征(Acute Coronary Syndrome,ACS),是一組由急性心肌缺血引起的臨床綜合征,病理基礎(chǔ)為冠狀動(dòng)脈粥樣硬化(artherosclerosis,As)斑塊破裂或糜爛引起的繼發(fā)完全或不完全閉塞性血栓形成的一組臨床綜合征。As不穩(wěn)定斑塊的破裂的原因復(fù)雜,但斑塊的不穩(wěn)定性與氧化應(yīng)激特別是氧化低密度脂蛋白(oxidation low density lipoprotein,OX-LDL)和基質(zhì)金屬蛋白酶9(matr

2、ix metalloproteinase,MMP-9)的活性密切相關(guān)。
　　目的：
　　以載脂蛋白 E基因缺陷小鼠(ApoE-/-)為 As模型,通過觀察何首烏總苷對(duì)ApoE基因缺陷小鼠體內(nèi)氧化應(yīng)激及As斑塊蛋白表達(dá)的影響,重點(diǎn)研究何首烏總苷對(duì)實(shí)驗(yàn)性As斑塊穩(wěn)定性的影響,及對(duì)MMP-9的可能調(diào)控機(jī)制,從實(shí)驗(yàn)病理角度,探討何首烏總苷可能的穩(wěn)定 As斑塊的機(jī)制,為從穩(wěn)定斑塊角度對(duì)冠心病的治療提供新思路和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法

3、：
　　以8周齡ApoE-/-小鼠為研究對(duì)象,0.15％膽固醇高脂飼料喂養(yǎng)16周復(fù)制動(dòng)脈粥樣硬化動(dòng)物模型,24只隨機(jī)分為模型組、何首烏總苷高(150mg?kg-1?d-1)、低劑量組(25mg?kg-1?d-1)、陽(yáng)性藥物對(duì)照組各6只,6只C57BL/6小鼠為陰性對(duì)照組。喂養(yǎng)16周后,行超聲生物顯微鏡檢查小鼠主動(dòng)脈、頸動(dòng)脈斑塊形態(tài)及性質(zhì)。眼眶取血并處死小鼠,分離主動(dòng)脈,10%中性福爾馬林固定。常規(guī)方法測(cè)定血脂、肝功、腎功。常規(guī)生化

4、法測(cè)定血漿一氧化氮（nitro oxide,NO)、總抗氧化能力（total antioxidation capacity,TAC)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)及血脂水平;采用主動(dòng)脈根部連續(xù)石蠟切片、HE染色觀察As斑塊的形成和Masson染色觀察斑塊部位膠原含量的變化。免疫組化方法觀察粥樣斑塊中巨噬細(xì)胞數(shù)量、平滑肌細(xì)胞數(shù)量、MMP-9、核轉(zhuǎn)錄因子NF-ΚB(nuclear factorΚB)、金屬蛋白酶組織抑制劑

5、TIMP-1(tissue inhibitor of metalloproteinase)蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1、As斑塊動(dòng)物模型復(fù)制
　　實(shí)驗(yàn)第16周后,模型組ApoE-/-小鼠的肉眼病變最明顯,其余各組 ApoE-/-小鼠的主動(dòng)脈內(nèi)均可看到較明顯的點(diǎn)狀或斑片狀隆起,多位于主動(dòng)脈竇至主動(dòng)脈弓血管分支處,其次為胸主動(dòng)脈和腹主動(dòng)脈。陰性對(duì)照組未看到有病變形成,內(nèi)膜光滑,血管彈性好,不易斷開。
　　2、利用超

6、聲生物顯微鏡觀察ApoE-/-小鼠動(dòng)脈IMT和動(dòng)脈斑塊的形態(tài)
　　發(fā)現(xiàn)各組apoE-/-小鼠主動(dòng)脈內(nèi)膜不光滑,IMT有不同程度增厚,但與陰性對(duì)照組沒有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05);模型組、何首烏總苷高低劑量組均有明顯斑塊形成,以升主動(dòng)脈最為顯著,其中大部分斑塊為穩(wěn)定性硬斑塊,可見鈣化及聲影。模型組有軟斑塊形成。陰性對(duì)照組沒有觀察到IMT增厚,動(dòng)脈內(nèi)膜光滑,未見有斑塊病變。
　　3、觀察何首烏總苷對(duì)ApoE-/-小鼠血脂、氧

7、化應(yīng)激的影響
　　何首烏總苷高、低劑量組與模型組之間血清總膽固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯（triglyceride,TG)、高密度脂蛋白-膽固醇（high-densitylipoprotein-cholesterol,HDL-C)均無顯著性差異(p>0.05),同時(shí),兩治療組之間也無顯著性差異(p>0.05),提示何首烏總苷在本實(shí)驗(yàn)中對(duì)小鼠血脂只有輕度的降低作用。
　　與模型組比較,何首烏總苷高

8、、低劑量治療組血漿中NO含量均顯著升高(分別為:32.89±25.79 vs.3.50±2.35;28.57±12.60vs.3.50±2.35,均為p<0.01)、TAC明顯增加(分別為:185.23±51.99 vs.73.69±38.28;184.54±42.06 vs.73.69±38.28,均為 p<0.01)、MDA含量顯著減低(分別為:12.83±2.25 vs.45.47±5.34,p<0.01;12.63±3.21 v

9、s.45.47±5.34,p<0.05)。
　　4、病理分析觀察ApoE-/-小鼠斑塊的形態(tài)和結(jié)構(gòu);
　　陰性對(duì)照組小鼠血管內(nèi)膜光滑,連續(xù)性好,中膜平滑肌細(xì)胞排列整齊,管壁厚薄均勻。而ApoE-/-小鼠主動(dòng)脈切片HE染色后光鏡下可見模型組ApoE-/-小鼠內(nèi)膜顯著增厚,均為成熟的粥樣斑塊,纖維帽較薄,纖維帽及斑塊內(nèi)部位可見大量泡沫細(xì)胞,有較大的脂質(zhì)池;何首烏總苷低劑量組和陽(yáng)性對(duì)照組均為粥樣斑塊;何首烏總苷高劑量組有2只形成纖

10、維斑塊,其余為粥樣斑塊,何首烏總苷高劑量組和陽(yáng)性對(duì)照組斑塊纖維帽較厚,有少量膽固醇結(jié)晶。在血管分支處也可以見到斑塊。各組在管腔面積和斑塊面積方面均無顯著性差異(p>0.05)。
　　5、Masson染色觀察ApoE-/-小鼠斑塊部位膠原含量的變化
　　模型組斑塊的膠原含量及占斑塊的面積比值較何首烏總苷高、低劑量組、陽(yáng)性對(duì)照組明顯減少(P<0.05),模型組斑塊的平滑肌細(xì)胞(SMC)含量較何首烏總苷高、低劑量組、陽(yáng)性對(duì)照組明顯

11、減少也明顯減少。
　　6、通過免疫組化染色的方法,觀察何首烏總苷對(duì)ApoE-/-小鼠斑塊部位CD68、α-SMA、NF-κB、MMP-9、TIMP-1蛋白表達(dá)的影響
　　ApoE-/-小鼠主動(dòng)脈粥樣斑塊的纖維帽及斑塊脂質(zhì)核心處均有不同數(shù)量的VSMCs和巨噬細(xì)胞,何首烏總苷高、低劑量組斑塊中VSMCs陽(yáng)性染色面積占斑塊面積的百分比均較模型組顯著增加(分別為:0.24±0.11 vs.0.14±0.11;0.23±0.17 vs

12、.0.14±0.11,均為 p<0.05)、巨噬細(xì)胞陽(yáng)性染色面積占斑塊面積的百分比均較模型組明顯降低(p<0.01);何首烏總苷高、低劑量組與陽(yáng)性對(duì)照組皆可明顯抑制或下調(diào)ApoE-/-小鼠主動(dòng)脈斑塊MMP-9表達(dá)(p<0.01);實(shí)驗(yàn)組與模型組相比,何首烏總苷高、低劑量組與陽(yáng)性對(duì)照組皆可明顯增加或上調(diào)ApoE-/-小鼠主動(dòng)脈斑塊TIMP-1表達(dá)量(p<0.01);與模型組比較,何首烏總苷高、低劑量組與陽(yáng)性對(duì)照組皆可明顯抑制或下調(diào)ApoE

13、-/-小鼠主動(dòng)脈斑塊NF-κB表達(dá)(分別:p<0.01;p<0.01;p<0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.何首烏總苷具有明顯的抗氧化作用,能顯著降低MDA的含量、顯著升高NO、總抗氧化能力。
　　2.何首烏總苷能增加As斑塊部位膠原含量。
　　3.何首烏總苷能抑制As斑塊部位CD68、MMP-9、NF-κB的表達(dá),增加As斑塊部位α-SMA、TIMP-1的表達(dá)。
　　4.何首烏總苷具有穩(wěn)定斑塊的作用,機(jī)制