小鼠肝臟SMS2過表達(dá)對動脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性的影響.pdf

1、目標(biāo)本研究旨在深入研究重組病毒AdV-SMS2介導(dǎo)的鞘磷脂合酶2(sphingomyelin synthase2，SMS2)過表達(dá)對載脂蛋白E(Apo E)KO小鼠動脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性的影響。
　　 背景：血漿SM濃度升高是冠心病獨立危險因素。SMS在體內(nèi)有兩個同工酶SMS1和SMS2，后者位于細(xì)胞膜上，與脂質(zhì)代謝相關(guān)的眾多受體聯(lián)系緊密。本教研室前期研究已初步證實，SMS2活性升高可導(dǎo)致多項動脈粥樣硬化(AS)密切相關(guān)的生化指

2、標(biāo)向潛在致AS方向發(fā)生改變并引起主動脈斑塊面積增加。然而，近期對年邁死者的解剖發(fā)現(xiàn)大多數(shù)人到晚年時，血管壁都或多或少有斑塊形成，但并沒有明顯癥狀。斑塊損傷、血栓形成是心腦血管急性事件(ACE)的真正元兇。因此，控制斑塊大小和穩(wěn)定性、防止易損斑塊損傷在動脈粥樣硬化疾病的防治中尤為重要。本課題在前期研究基礎(chǔ)上將進(jìn)一步深入探索SMS2過表達(dá)與AS斑塊穩(wěn)定性之間的關(guān)系。
　　 方法：本課題利用本實驗室前期構(gòu)建的攜帶SMS2基因表達(dá)框的重

3、組V型腺病毒(AdV-SMS2)為工具，轉(zhuǎn)染ApoE KO小鼠，建立小鼠肝臟SMS2過表達(dá)模型，以攜帶報告基因GFP的重組腺病毒(AdV-GFP)轉(zhuǎn)染的ApoE KO小鼠作為對照組，分別給予高脂飼養(yǎng)，通過對動脈粥樣硬化斑塊的形態(tài)學(xué)分析，對斑塊穩(wěn)定性密切相關(guān)的重要因子如單核細(xì)胞趨化因子(monocyte chemoattractant protein-1，MCP-1)，基質(zhì)金屬蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-

4、2，MMP-2)，環(huán)氧化酶-1和-2(cyclooxygenase-1，-2；COX-1，-2)，組織因子(tissue factor，TF)等基因水平和蛋白水平的生化檢測，以及對外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞(endothelial progenitorcells，EPC)數(shù)量和功能分析，重點研討SMS2與AS斑塊穩(wěn)定性之間的關(guān)系，以確定SMS2可否作為新靶點，控制AS斑塊穩(wěn)定性，降低急性心血管事件(acutecardiovascular even

5、ts，ACE)發(fā)生的概率。
　　 結(jié)果：實驗結(jié)果顯示，與AdV-GFP組相比，SMS2過表達(dá)導(dǎo)致：
　　 1.肝SMS2 mRNA水平增加2.5倍(p<0.001)；肝SMS總活性增加2.3倍(p<0.001)；血漿LDL-C增加1.48倍(p<0.05)；血漿HDL-C降低29％(p<0.05)；SM/PC增加1.5倍(p<0.05)；
　　 2.小鼠主動脈弓AS斑塊面積增加1.7倍(P<0.001)，整條主動

6、脈AS斑塊面積增加1.2倍(P<0.001)；
　　 3.小鼠主動脈根部死亡核心面積增加1.6倍(P<0.001)；膠原含量減少17％(P<0.001)：
　　 4.MMP-2，MCP-1和TF的mRNA和蛋白表達(dá)水平顯著提高(P<0.001)；
　　 5.COX-2的mRNA和蛋白表達(dá)水平顯著升高(p<0.001)；與之相反，COX-1的mRNA和蛋白表達(dá)水平則顯著下降(p<0.001)；
　　 6.外

7、周血中的EPC的數(shù)量顯著減少(p<0.001)；內(nèi)皮祖細(xì)胞克隆形成單位數(shù)量減少40％(p<0.05)。
　　 結(jié)論：不穩(wěn)定斑塊最明顯特征是具有脂核增大、纖維帽變薄、炎癥活動增強、內(nèi)皮功能異常和凝血機制激活等特點。本研究發(fā)現(xiàn)，腺病毒介導(dǎo)小鼠肝臟SMS2過表達(dá)導(dǎo)致主動脈根部斑塊壞死核心面積增大，主動脈根部膠原含量降低；促動脈粥樣硬化的炎癥因子如MCP-1，TF，MMP-2，COX-2的表達(dá)顯著升高；COX-1的表達(dá)，外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞