載脂蛋白A-Ⅰ在機(jī)體急性相反應(yīng)中對(duì)中性粒細(xì)胞功能的調(diào)節(jié)作用研究.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)的研究?jī)?nèi)容主要包括兩個(gè)方面:一、研究血漿高密度脂蛋白(highdensity lipoprotein,HDL)在內(nèi)毒素(endotoxin)誘導(dǎo)的急性相反應(yīng)(acute phaseresponse,APR)中其組分的改變:二、重點(diǎn)研究載脂蛋白A-Ⅰ(apolipoprotein A-Ⅰ,apoA-Ⅰ)對(duì)趨化寡肽(N-formyl-methionyl-leucyl-phenylalanine,f-MLP)以及佛波酯(phorbol

2、myristate acetate,PMA)激活的中性粒細(xì)胞(polymorphonuclearleukocyte,PMN)功能的影響。本實(shí)驗(yàn)采用革蘭氏陰性菌內(nèi)毒素脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)在家兔體內(nèi)誘導(dǎo)APR作為研究對(duì)象,觀察APR發(fā)展過(guò)程中兔血漿HDL的改變,尤其是apoA-Ⅰ的變化,為APR過(guò)程中apoA-Ⅰ由HDL顆粒中釋放出來(lái)并發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用的可能性提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。雄性新西蘭兔,2.2～2.5kg,

3、靜脈注射LPS1.0mg/kg誘導(dǎo)APR,于APR不同時(shí)相采集血樣:①超離心制備兔血漿HDL(d=1.063～1.21g/mL),以分子篩色譜分析其分子大小的改變,通過(guò)變性聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-polyacrylamide gelelectrophoresis,SDS-PAGE),凝膠圖像分析以及ELISA等實(shí)驗(yàn)手段分析其蛋白成分的變化;②8％PEG-6000化學(xué)沉淀法分離血漿HDL,測(cè)定膽固醇和三酰甘油含量的變化。超離心制備的兔

4、血漿HDL經(jīng)過(guò)乙醇/乙醚法脫脂得到HDL載脂蛋白(apolipoproteins of HDL,apoHDL),apoHDL經(jīng)高效灌注色譜儀陰離子交換樹(shù)脂分離apoHDL各組分,收集各組分峰,超濾離心脫鹽濃縮后以SDS-PAGE鑒定各峰蛋白成分,收集純apoA-Ⅰ,用于PMN功能研究。肝素抗凝無(wú)菌新鮮兔血,采用梯度離心法分離純化PMN:PBS稀釋(1:1)的兔抗凝全血小心添加至淋巴細(xì)胞分離液(d=1.077g/mL)上層(v/v,1:1