mGluRⅠ的激活在中性粒細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞相互黏附中的調(diào)節(jié)作用.pdf

1、谷氨酸(glutamate，Glu)是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中一類重要的興奮性神經(jīng)遞質(zhì)，通過激活谷氨酸受體(glutamatereceptors，GluRs)發(fā)揮作用。Glu過度激活其受體所引起的興奮性神經(jīng)毒性在神經(jīng)損傷的發(fā)生中具有重要作用。近年來一些研究者注意到在中樞神經(jīng)系統(tǒng)外的外周非神經(jīng)組織也廣泛存在GluRs的表達(dá)，但它們的生理及病理意義遠(yuǎn)未闡明。本研究室的前期研究發(fā)現(xiàn)，親離子型谷氨酸受體中的N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受體的激活可以

2、通過促進(jìn)中性粒細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞之間的黏附而加重急性肺損傷。但代謝型谷氨酸受體在此過程中有何影響未見報道。本實驗通過觀察I組代謝型谷氨酸受體(groupImetabotropicglutamatereceptor,mGluRI)在中性粒細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞上的表達(dá)，以及該受體的激活對中性粒細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞黏附的影響，并對其可能機(jī)制進(jìn)行研究，為深入研究肺臟等外周組織中谷氨酸受體的生理及病理意義，拓展肺部疾病機(jī)制及防治的研究提供新的思路。
　

3、　 方法：取健康人新鮮靜脈血Ficoll-Hypaque密度梯度離心法分離中性粒細(xì)胞，培養(yǎng)人正常臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(humannormalumbilicalveinendothelialcells，HUVE-12)，免疫細(xì)胞化學(xué)法和Realtime-PCR法檢測中性粒細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞mGluRI(包括mGluR1和mGluR5)的表達(dá)，分別應(yīng)用不同濃度，不同時間的mGluRI的特異性激動劑S-3，5．二羥基苯甘氨酸(S-3，5-dihydr

4、oxy-phenylglycine，S-DHPG)處理中性粒細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞，通過比色法檢測中性粒細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞的黏附率，采用流式細(xì)胞技術(shù)測定中性粒細(xì)胞黏附分子CDlla和內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子ICAM-1表達(dá)的變化。
　　 結(jié)果：
　　 1．中性粒細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞中有mGluRI的mGluR1和mGluR5的mRNA和蛋白表達(dá)。
　　 2．S-DHPG在10-8～10-6mol/L濃度范圍內(nèi)作用于中性粒細(xì)胞呈劑量依賴性提

5、高中性粒細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞之間的黏附率(p

6、phenylglycine，(±)-MCPG]0.5mmol/L可以顯著阻斷激動劑S-DHPG(10-6mol/L，lh)的促黏附及促CDlla表達(dá)效應(yīng)（P<0.01）。
　　 3．S-DFPG在10-8～10.6mol/L濃度范圍內(nèi)作用于內(nèi)皮細(xì)胞呈劑量依賴性提高中性粒細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞之間的黏附率(P<0.05或P<0.01)；10-6mol/L的S-DHPG單獨作用于內(nèi)皮細(xì)胞0.5h，即可促進(jìn)中性粒細(xì)胞黏附于內(nèi)皮細(xì)胞（p<0.0

7、1）；隨著作用時間的延長，中性粒細(xì)胞黏附于內(nèi)皮細(xì)胞的比率并不隨之增加；10-6mol/L的S-DHPG單獨作用于內(nèi)皮細(xì)胞可促ICAM-1表達(dá)(P<0.01)；mGluRI拮抗劑(±)-MCPG(0.5mmol/L)可以顯著阻斷激動劑S-DHPG(10-6mol/L，lh)的促黏附效應(yīng)及促ICAM-1表達(dá)效應(yīng)(P<0.01)。
　　 結(jié)論：
　　 1．中性粒細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞均可表達(dá)mGluRl/5受體。
　　 2．中