PS-341對多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞及骨髓基質(zhì)細(xì)胞BAFF與APRIL影響及機制研究.pdf

1、中山大學(xué)博士學(xué)位論文PS-341對多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞及骨髓基質(zhì)細(xì)胞BAFF與APRIL影響及機制研究姓名：李午平申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：內(nèi)科學(xué)（血液病）指導(dǎo)教師：羅紹凱20090518中山大學(xué)博士學(xué)位論文內(nèi)多級信號串聯(lián)，這種對正常的細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的破壞會導(dǎo)致細(xì)胞的死亡。而對2 0 S蛋白酶體的抑制可防止特異蛋白的水解。體外試驗證明硼替佐米對多種類型的癌細(xì)胞具有細(xì)胞毒性包括多發(fā)性骨髓細(xì)胞株及其他多種腫瘤細(xì)胞如淋巴瘤細(xì)胞、肺癌細(xì)胞、前列腺癌細(xì)胞及

2、大腸癌細(xì)胞等。為了研究多P S 一3 4 1 對發(fā)性骨髓瘤治療作用的一種可能的新機制我們設(shè)計了以下實驗。主要研究方法和結(jié)果：1 、體外培養(yǎng)多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞株R P M I 8 2 2 6 與9 3 t 3 以及1 0 例病人原代骨髓瘤細(xì)胞，病人原代骨髓瘤細(xì)胞來源于我科住院病人。無菌抽取病人骨髓液5 一l O m l ( 肝素抗凝) ，淋巴細(xì)胞分離液分離得到單個核細(xì)胞后經(jīng)多次貼壁傳代培養(yǎng)分離貼壁生長細(xì)胞，并以流式細(xì)胞儀鑒定骨髓瘤細(xì)胞純度。

3、分離后獲得的貼壁細(xì)胞經(jīng)過反復(fù)傳代到第5 代時以流式細(xì)胞儀鑒定其為骨髓基質(zhì)細(xì)胞并用于實驗，最終用于實驗的骨髓瘤細(xì)胞純度達(dá)到9 5 ％。利用R T —P C R 技術(shù)檢測骨髓瘤細(xì)胞及病人骨髓基質(zhì)干細(xì)胞中B A F F 、A P R I L 、B A F F —R 、B C M A 及T A C I的表達(dá)情況。實驗結(jié)果表明多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞及病人骨髓基質(zhì)細(xì)胞均表達(dá)有B A F F 和A P R I L 及B A F F - R 、T A C I

4、 ，其中有三個病人不表達(dá)B C M A ；骨髓基質(zhì)干細(xì)胞同樣表達(dá)B A F F 及A P R I L 。2 、體外培養(yǎng)多發(fā)性骨髓細(xì)胞株及病人原代骨髓瘤細(xì)胞，利用E L I S A 技術(shù)檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清中可溶性B A F F 及A P R I L 的水平，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞培養(yǎng)上清中可以檢測到高水平的可溶性B A F F 及A P R I L ，說明骨髓瘤細(xì)胞在體外可以自分泌可溶性B A F F 及A P R I L ；在與P S - 3 4 1

5、共培養(yǎng)的骨髓瘤細(xì)胞后同樣檢測培養(yǎng)上清中可溶性B A F F 及A P R I L 的水平時發(fā)現(xiàn)其水平明顯下調(diào)，與未用P S 一3 4 1 共培養(yǎng)組相比較有顯著性差異( P < O ．0 5 ) 。體外培養(yǎng)多發(fā)性骨髓瘤病人來源骨髓基質(zhì)干細(xì)胞及健康人骨髓基質(zhì)干細(xì)胞，以E L I S A 方法測定細(xì)胞培養(yǎng)上清中可溶性B A F F 及A P R I L 水平，發(fā)現(xiàn)多發(fā)性骨髓瘤病人基質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)上清中有高水平的可溶性B A F F 及A