EGCG對多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞的作用及機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、本研究分為二部分：第一部分、EGCG對多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞KM3增殖及蛋白酶體活性的抑制作用。
　　 目的: 探討綠茶茶多酚成分之一表沒食子兒茶素沒食子酸酯[(－)-epigallocatechin-3-gallate (EGCG)]對多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞增殖和蛋白酶體20s復(fù)合物活性的影響。
　　 方法: 體外培養(yǎng)KM3多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞，在不同濃度EGCG作用不同時(shí)間后以MTT法測定細(xì)胞增殖活性；經(jīng)不同濃度EGCG作用后的KM

2、3細(xì)胞作用于蛋白酶體特異性底物，檢測細(xì)胞中蛋白酶體20s復(fù)合物的活性。
　　 結(jié)果: 不同濃度的EGCG作用于KM3細(xì)胞不同時(shí)間，均能抑制其增殖，其作用在5-100μmol/L的濃度范圍內(nèi)呈劑量-時(shí)間依賴性。作用48小時(shí)后，各濃度藥物對細(xì)胞增殖活性的抑制率均超過20%。作用相同時(shí)間，隨著作用濃度的增高，EGCG對KM3細(xì)胞蛋白酶體活性的抑制作用逐漸增強(qiáng)，100μmol/L的EGCG作用后抑制率為78.5±4.46%，與對照組相比

3、有顯著性差異（P<0.01）。
　　 結(jié)論: EGCG對多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞KM3有明顯的生長抑制作用，其對KM3細(xì)胞中20S蛋白酶體活性的抑制效應(yīng)可能為其機(jī)制之一，并呈劑量依賴性。
　　 第二部分、EGCG對多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞KM3促血管新生作用的抑制效應(yīng)及機(jī)制初探。
　　 目的: 研究綠茶茶多酚成分之一表沒食子兒茶素沒食子酸酯[(－)-epigallocatechin-3-gallate] (EGCG)對多發(fā)性骨髓

4、瘤細(xì)胞促血管新生作用的影響并初步探討其機(jī)制。
　　 方法: 體外培養(yǎng)KM3多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞，觀察不同濃度EGCG作用后的培養(yǎng)上清對血管內(nèi)皮細(xì)胞株HUVEC遷移和形成血管能力的影響。ELISA法檢測KM3細(xì)胞培養(yǎng)上清中血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）分泌水平；RT-PCR方法檢測KM3細(xì)胞VEGF mRNA表達(dá)水平。
　　 結(jié)果: EGCG以濃度依賴方式抑制KM3細(xì)胞培養(yǎng)上清促內(nèi)皮細(xì)胞遷移的作用，5，25，50和100μmol

5、/L的EGCG遷移細(xì)胞數(shù)目分別為414±27，299±70，202±42及 116±13個(gè)，且EGCG的濃度與內(nèi)皮細(xì)胞的遷移數(shù)目呈負(fù)相關(guān)（r=-0.952,p<0.05）。同時(shí)，內(nèi)皮細(xì)胞形成小管的面積隨EGCG濃度的升高而減少，25及50μmol/L時(shí)的面積分別是0.088±0.003和0.061±0.001 mm2，均明顯低于對照組（p＜0.01)，小管面積與EGCG濃度呈負(fù)相關(guān)（r=-0.888,p<0.05）。5、25、50、10

6、0μmol/L的EGCG作用于KM3細(xì)胞48小時(shí)后培養(yǎng)上清中VEGF的含量分別為1399.0±47.4pg/mL，660.1±5.7pg/mL，108.5±5.8pg/mL和26.2±18.6pg/mL，與對照組比較，25、50、100μmol/L組均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＜0.01）。RT-PCR結(jié)果顯示EGCG抑制KM3細(xì)胞VEGF的 mRNA水平表達(dá)，且呈濃度依賴性。
　　 結(jié)論: EGCG能顯著抑制KM3多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞的促血