牛新孢子蟲與牛瑟氏泰勒蟲多重PCR檢測(cè)方法的建立.pdf_第1頁
已閱讀1頁,還剩40頁未讀, 繼續(xù)免費(fèi)閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡(jiǎn)介

1、牛瑟氏泰勒蟲病是由泰勒科、泰勒屬的瑟氏泰勒蟲(Theileria sergenti)寄生于牛體內(nèi)引起的一種血液原蟲病。牛新孢子蟲病(Neosporosis)是由犬新孢子蟲(Neospora Caninum)或類新孢子蟲(Neosporalike)寄生于牛體內(nèi)所引起的一種原蟲病。 本研究首先利用DNASIS軟件分別對(duì)Kawazu等根據(jù)瑟氏泰勒蟲P33表面蛋白基因序列設(shè)計(jì)的引物和GenBank登錄的犬新孢子蟲種屬特異性基因片段Nc-

2、5序列設(shè)計(jì)的引物進(jìn)行二聚體化、同源性和互補(bǔ)性分析,以避免引物之間形成穩(wěn)定的引物二聚體和避免具有較高的同源性和互補(bǔ)性。同時(shí)在已建立的牛瑟氏泰勒蟲和牛新孢子蟲常規(guī)PCR的基礎(chǔ)上,優(yōu)化引物濃度,Mgcl<,2>濃度,dNTP濃度,循環(huán)次數(shù)等反應(yīng)條件后,建立了檢測(cè)牛瑟氏泰勒蟲和牛新孢子蟲的多重PCR。 本體系特異擴(kuò)增片段理論大小分別為:瑟氏泰勒蟲864bp,新孢子蟲338bp。體系優(yōu)化的結(jié)果為:最佳引物濃度瑟氏泰勒蟲為0.2pmol/m

3、L,新孢子蟲0.2pmol/mL;dNTP最佳濃度為1.6mmol/L;多重PCR的最佳反應(yīng)模式為94℃5min,94℃30s,56℃30s,72℃1min的循環(huán),共30個(gè)循環(huán),然后經(jīng)72℃10min延伸,最后4℃7min結(jié)束PCR擴(kuò)增。用優(yōu)化后的PCR擴(kuò)增體系擴(kuò)增出與實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)相符的864bp和338bp特異性電泳帶。敏感性試驗(yàn)結(jié)果表明,該多重PCR可以檢測(cè)到16fg/mL瑟氏泰勒蟲和18pg/mL新孢子蟲的核酸模板;用感染牛附紅細(xì)胞體

4、的抗凝血、牛新孢子蟲蟲體、感染牛瑟氏泰勒蟲的抗凝血、剛地弓形蟲蟲體、牛魏氏梭菌、牛副結(jié)核桿菌、牛大腸桿菌的DNA進(jìn)行多重PCR擴(kuò)增,以確定該多重PCR的特異性,結(jié)果新孢子蟲和瑟氏泰勒蟲均擴(kuò)增出與試驗(yàn)設(shè)計(jì)的大小一致的核酸片段;而對(duì)照的病原體未擴(kuò)增出任何核酸片段;將用常規(guī)PCR檢測(cè)呈新孢子蟲陽性牛的病料和常規(guī)PCR檢測(cè)呈瑟氏泰勒蟲陽性牛的抗凝血進(jìn)行多重PCR擴(kuò)增,結(jié)果多重PCR的檢測(cè)結(jié)果與常規(guī)PCR的檢測(cè)結(jié)果符合率為100%。以上結(jié)果說明本

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評(píng)論

0/150

提交評(píng)論