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文檔簡介
1、牛瑟氏泰勒蟲病是由泰勒科、泰勒屬的瑟氏泰勒蟲(Theileria sergenti)寄生于牛體內(nèi)引起的以高熱、貧血、出血、消瘦和體表淋巴結腫大為主要臨床癥狀的一種血液原蟲病。近年來,牛瑟氏泰勒蟲病在我國的流行區(qū)域逐漸擴大,發(fā)病率和死亡率也呈上升趨勢,已給養(yǎng)牛業(yè)帶來嚴重的經(jīng)濟損失,是威脅畜牧業(yè)健康發(fā)展的重要疫病之一。
牛瑟氏泰勒蟲P23、P33表面蛋白基因均具有較好的抗原性,在抗牛瑟氏泰勒蟲感染中起到重要作用。為更好的利用 P2
2、3和 P33表面蛋白,本研究以pMD18-T-P23-P33為模板,設計特異性引物,PCR擴增牛瑟氏泰勒蟲P23-33融合基因,克隆、酶切P23-33融合基因后,亞克隆至腺病毒穿梭載體pCR259。將構建的重組穿梭質粒pCR259-P23-33轉化至含腺病毒骨架質粒Transpose-Ad294的E.coli HighQ-1?感受態(tài)細胞中,經(jīng)同源重組獲得重組腺病毒質粒pAd-P23-33。PCR、酶切鑒定正確后轉染HEK-293細胞,包
3、裝重組腺病毒,RT-PCR和IPMA檢測基因表達情況。測定病毒滴度后,免疫BALB/c小鼠,檢測血清中抗體水平和細胞因子IL-4、IFN-γ水平,評價重組腺病毒的免疫效果。
結果顯示,成功構建含1135bp融合基因的重組腺病毒質粒pAd-P23-33,經(jīng)RT-PCR和IPMA檢測融合基因在BHK293細胞中獲得表達,測定重組腺病毒滴度為6.3×107IU/ml。重組腺病毒 pAd-P23-33免疫 BALB/c小鼠后,血清中的
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