湖北省牛瑟氏泰勒蟲的分子進化分析及分子iELISA診斷方法的建立.pdf

1、分類號華中農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文湖北省牛瑟氏泰勒蟲的分子進化分析及分子逐LISA診斷方法的建立MolecularPhylogeneticstudiesonThe刁沁riasergen吞inHubeiPrevineeandEstablishmentofmolecularindireetELISAmethodsfordiagnosingTheileriosis碩士研究生:趙金華指導(dǎo)教師:趙俊龍教授指導(dǎo)小組:趙俊龍教授姚寶安教授周艷琴副教

2、授專業(yè):預(yù)防獸醫(yī)學(xué)獲得學(xué)位名稱:農(nóng)學(xué)碩士研究方向:寄生蟲免疫獲得學(xué)位時間:2008年6月華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院二00八年六月湖北省牛瑟氏泰勒蟲的分子進化分析及分子iEllSA診斷方法的建立3.1研究的目的意義.........................................……，.................................................……433.2試驗材料............

3、.................................................................................................……433.2.1質(zhì)粒與菌株....................................................................................................……433.2.2

4、主要藥品及試劑..........................................................................................……443.2.3主要試劑及溶液的配制...............................................................................……453.3試驗方法..............

5、...............................................................................................……463.3.1重組表達質(zhì)粒的構(gòu)建及鑒定........................................................................……463.3.2重組表達質(zhì)粒在BL21一CodonPlus中的

6、誘導(dǎo)表達......................................……473.3.3最佳誘導(dǎo)表達條件的確定...........................................................................……473.3.4表達產(chǎn)物存在形式的檢測...............................................................

7、............……473.3.5可溶性表達產(chǎn)物的提取...............................................................................……473.3.6不溶性表達產(chǎn)物(包涵體)的提取和復(fù)性...............................................……483.3.7SDS一PAGE電泳.................

8、...........................................................................……483.3.8認estem一blot試驗..........................................................................................……483.4結(jié)果與分析.....................

9、.....................……，.........................................................……493.4.1pGEx一KG一P33與pGEx一KG一p23重組表達質(zhì)粒的構(gòu)建及原核表達....……493.4.2PE不28a一P33與pET28a一p23兩種重組表達質(zhì)粒的構(gòu)建及原核表達....……56第四章牛泰勒蟲病分子間接ELIsA診斷方法的建立及初步應(yīng)用二“”“““

10、““““““….“4.1研究的目的意義.................................................................................................……654.1.1材料與方法..........................................................................................

11、..........……“4.1.2試驗方法........................................................................................................……664.2結(jié)果與分析..................................................................................

12、.......................……704.2.1酶標(biāo)反應(yīng)板均一性的測定.....................................……，.............................……704.2.2GST一P33和GST一p23兩種融合蛋白ELIsA方法的建立........................……704.2.3His一P33和His一p23分子間接EuSA診斷方法的建立.....

13、........................……724.2.4間接EUSA的特異性試驗.........................................................................……824.2.5His一p33P23間接ELISA的重復(fù)性檢測....................................................……844.2.6His一P33幣2

14、3間接EUSA敏感性試驗........................................................……864.2.7His一P33間接EllSA和His一p23間接EusA檢測牛體內(nèi)瑟氏泰勒蟲特異性抗體的水平.................................................................................................

15、............……864.2.8His一P33和His一p23包被EuSA板的保質(zhì)期試驗..................................……884.2.9His一P33和His一23兩種蛋白間接EUSA方法的臨床初步應(yīng)用.........……884.2.10His一P33、His一p23兩種蛋白單獨包被的EUSA與兩種蛋白混合后包被進行ELISA試驗的比較..........................