牛瑟氏泰勒蟲P23和P33表面蛋白重組基因在原核和真核細(xì)胞的表達(dá).pdf

1、牛瑟氏泰勒蟲病是由泰勒科、泰勒屬的瑟氏泰勒蟲（Theileria sergenti）寄生于牛體內(nèi)引起的以高熱、貧血、消瘦和體表淋巴結(jié)腫大為主要臨床癥狀的一種血液原蟲病，廣泛分布于中國、日本、韓國等東亞地區(qū)。近幾年來，牛瑟氏泰勒蟲病在我國的流行區(qū)域逐漸擴(kuò)大，發(fā)病率和死亡率不斷上升，已成為嚴(yán)重威脅養(yǎng)牛業(yè)健康發(fā)展的重要疫病之一。
　　牛瑟氏泰勒蟲抗原成分復(fù)雜，其中P23和P33表面蛋白具有較好的免疫原性，在抗牛瑟氏泰勒蟲感染中具有重要作

2、用。為更好的利用P23和P33表面蛋白，我們以牛瑟氏泰勒蟲基因組DNA為模板，通過重疊延伸拼接聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(SOE-PCR)把P23和P33表面蛋白基因連接，兩基因之間插入一個linker(Gly4Ser)3，經(jīng)EcoR I和Xho I雙酶切，得到1151bp的雙基因融合片段，克隆于表達(dá)質(zhì)粒 pGEX-4T-1中，構(gòu)建了雙基因重組表達(dá)載體pGEX-4T-P23-P33，轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21，經(jīng)IPTG誘導(dǎo)，表達(dá)出預(yù)期大小的融合蛋白。<

3、br>　　Western blot檢測結(jié)果顯示，該蛋白與牛瑟氏泰勒蟲陽性血清呈陽性反應(yīng)，表明融合蛋白具有反應(yīng)原性。為進(jìn)一步探索牛瑟氏泰勒蟲的表面蛋白基因融合產(chǎn)物作為雙價疫苗的可行性，本研究以pMD18-T-P23-P33為模板，經(jīng)PCR擴(kuò)增獲得牛瑟氏泰勒蟲P23-P33融合基因，重新克隆于pMD18-T simple載體上，重組質(zhì)粒經(jīng)PCR、BamHⅠ和EcoRⅠ雙酶切鑒定后測序分析，再將其定向插入真核表達(dá)載體 pVAXⅠ，構(gòu)建真核表達(dá)