牛新孢子蟲亞單位疫苗的研究.pdf

1、新孢子蟲病(Neosporiasis)是由犬新孢子蟲(Neospora caninum)寄生于犬、牛、馬、羊等多種宿主動物細胞內(nèi)而引起的一種原蟲病。新孢子蟲病是多種家畜共患的一種原蟲病，該病對牛的危害尤為嚴重。目前，還沒有防制新孢子蟲病的有效措施，一般認為疫苗免疫是預防牛流產(chǎn)和降低經(jīng)濟損失的可行性措施，因此，開發(fā)新疫苗已成為該領(lǐng)域研究熱點。
　　本試驗通過體外培養(yǎng)新孢子蟲，并采用液氮-水浴反復凍融及超聲波裂解蟲體，經(jīng)葡聚糖凝膠層析

2、分離純化出多種可溶性抗原，將分離純化的可溶性抗原經(jīng)SDS-PAGE分析蛋白分子量大約為43KDa、36KDa和33KDa，分別與新孢子蟲兩種表面抗原和一種致密顆?？乖鄬?jīng)Western-blotting分析，所分離的抗原蛋白均具有反應原性。將純化蛋白濃縮合并分別輔以Cp-M、IMS1313和Polygen三種佐劑及PBS免疫沙鼠，測定沙鼠的體液免疫和細胞免疫應答，以評價疫苗的免疫效果。
　　應用IFAT對免疫后沙鼠每周抗體效

3、價進行測定，結(jié)果顯示，三個佐劑組的抗體效價均高于PBS組，其中Cp-M組效價最高，從二免后第二周起PBS組與三個佐劑組抗體效價均差異極顯著(P＜0.01)，最高抗體效價可達1:1600，攻毒后，各組抗體效價均顯著上升，Cp-M組最高可達1:3200。
　　免疫沙鼠的細胞免疫測定分別采用檢測T淋巴細胞亞群CD4+、CD8+百分含量及淋巴細胞轉(zhuǎn)化試驗進行評估。結(jié)果顯示，疫苗Cp-M組、IMS1313組、Polygen組和PBS組的CD

4、4+細胞含量均高于對照組，Cp-M組、IMS1313組和Polygen組與對照組均差異極顯著（P＜0.01）。四種疫苗組的CD8+細胞含量均高于對照組，Cp-M組、IMS1313組與對照組差異極顯著（P＜0.01），四種疫苗組的CD4+/CD8+值均高于對照組，Cp-M組與對照組差異極顯著（P＜0.01）。疫苗Cp-M組淋巴細胞轉(zhuǎn)化率明顯高于對照組，差異顯著（P＜0.05）。
　　攻毒試驗后經(jīng)計算得出疫苗保護率分別為，Cp-M組7