樺褐孔菌多糖對牛源犬新孢子蟲感染的孕鼠胎盤的抗損傷作用.pdf

1、犬新孢子蟲（Neospora caninum）是寄生于牛、羊、犬等多種哺乳動物細(xì)胞內(nèi)的一種原蟲。新孢子蟲病可通過胎盤垂直傳播，對孕畜胎盤造成嚴(yán)重傷害，引起母畜流產(chǎn)、死胎或新生兒運動障礙和神經(jīng)系統(tǒng)疾病。該病對牛的危害極為嚴(yán)重，已成為危害養(yǎng)牛業(yè)健康發(fā)展的主要因素之一。目前對犬新孢子蟲的防控沒有特效藥物和疫苗。本研究以樺褐孔菌多糖為試驗藥物，通過體外體內(nèi)抗蟲試驗，病理學(xué)觀察，胎盤凋亡基因的檢測，以及影響孕鼠胎盤物質(zhì)轉(zhuǎn)運、胎盤血流和胎兒生長發(fā)育

2、等各項指標(biāo)檢測，探討樺褐孔菌多糖對新孢子蟲感染孕鼠胎盤的保護作用，以期為抗新孢子蟲藥物的開發(fā)利用提供理論及試驗依據(jù)。
　　1、樺褐孔菌多糖體外抗新孢子蟲速殖子增殖試驗
　　本試驗應(yīng)用牛源犬新孢子蟲感染正常Vero細(xì)胞建立體外感染細(xì)胞模型，利用MTT法進行樺褐孔菌多糖的細(xì)胞毒性試驗和抗蟲試驗，通過比較細(xì)胞增殖率，確定藥物體外抗蟲效果，篩選出體外抗蟲的最佳劑量。結(jié)果表明，樺褐孔菌多糖濃度為100μg/ml時，在24 h、48 h

3、時細(xì)胞增殖率最高，分別為37％和48%，抗新孢子蟲效果最好，且無細(xì)胞毒性。
　　2、樺褐孔菌多糖對新孢子蟲孕鼠胎盤損傷的保護作用觀察
　　本試驗以牛源犬新孢子蟲孕鼠感染模型為研究對象，測定不同濃度的樺褐孔菌多糖對孕鼠活胎數(shù)、胎盤重量和胎盤系數(shù)，孕鼠胎盤組織細(xì)胞損傷的影響。結(jié)果表明，活胎數(shù)、胎盤重量和胎盤系數(shù)樺褐孔菌多糖高中劑量組與模型組孕鼠比較，差異極顯著（P<0.01）；免疫組化顯示樺褐孔菌多糖高中劑量組棕色抗原沉淀顏色明

4、顯比模型對照組淺，減輕了牛源犬新孢子蟲對胎盤組織結(jié)構(gòu)的損傷。
　　3、樺褐孔菌多糖對新孢子蟲感染孕鼠胎盤凋亡基因表達(dá)的影響
　　本試驗提取小鼠胎盤組織總RNA，采用PCR芯片技術(shù)檢測胎盤凋亡基因，并對基因進行了比對分析。結(jié)果表明，RT-PCR檢測出了66個基因，樺褐孔菌多糖與染蟲組比較，63個基因上調(diào)，其中有8個差異基因，為BCL2、TNFRSF11B、RIPK1、BIRC2(C-IAP2)、BCL2A1、BCL2A1、DA

5、D1、BNIP2；3個基因下調(diào)。
　　4、樺褐孔菌多糖對新孢子蟲感染孕鼠胎盤物質(zhì)轉(zhuǎn)運的影響
　　本試驗應(yīng)用ELISA法檢測新孢子蟲感染孕鼠血清中 CG、PL、E3及ACH激素含量變化，以此確定樺褐孔菌多糖對感染孕鼠胎盤物質(zhì)轉(zhuǎn)運的影響。結(jié)果顯示，樺褐孔菌多糖高中劑量組可以使感染孕鼠CG、PL、E3及ACH水平顯著上調(diào)，與模型組比較均差異極顯著（P<0.01）。
　　5、樺褐孔菌多糖對新孢子蟲感染孕鼠胎盤血流量及胎兒生長發(fā)

6、育相關(guān)細(xì)胞因子的影響
　　本試驗以新孢子蟲孕鼠感染模型為研究對象，檢測孕鼠胎盤細(xì)胞懸液中與胎盤血流量及胎兒生長發(fā)育相關(guān)激素CRH、TGF-β、IGF-2的含量。結(jié)果表明，樺褐孔菌多糖高中劑量組可以顯著緩解因新孢子蟲感染引起的CRH、TGF-β、IGF-2分泌紊亂的現(xiàn)象。
　　結(jié)論：
　　1、樺褐孔菌多糖具有良好的體外抗新孢子蟲作用，濃度為100μg/ml時效果最佳，且無細(xì)胞毒性。可以用于體內(nèi)抗新孢子蟲試驗。
　　

7、2、樺褐孔菌多糖能夠緩解新孢子蟲對孕鼠胎盤組織細(xì)胞的損傷作用，降低了因新孢子蟲感染而引起的流產(chǎn)及死胎。
　　3、樺褐孔菌多糖可改變新孢子蟲感染孕鼠胎盤相關(guān)凋亡基因的表達(dá)，減少胎盤組織細(xì)胞的凋亡，改善因細(xì)胞凋亡引起的胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞萎縮，從而降低流產(chǎn)、死胎的發(fā)生。
　　4、樺褐孔菌多糖可以顯著對抗因新孢子蟲感染造成的胎盤物質(zhì)轉(zhuǎn)運障礙、血液灌注不足及胎兒發(fā)育遲滯，降低了因胎盤內(nèi)分泌紊亂造成的胎兒宮內(nèi)發(fā)育遲緩、流產(chǎn)、死產(chǎn)等不良妊娠的