樺褐孔菌多糖對(duì)小鼠免疫細(xì)胞的影響.pdf

1、目的：提取測(cè)定樺褐孔菌多糖，檢測(cè)樺褐孔菌多糖對(duì)小鼠免疫細(xì)胞細(xì)胞因子mRNA表達(dá)，以及對(duì)細(xì)胞因子分泌的影響，為闡明樺褐孔菌多糖的免疫調(diào)節(jié)作用及其機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：稱取樺褐孔菌原藥材粉碎處理，用蒸餾水浸泡12 h后，用蒸餾水加熱提取兩次，過(guò)濾，合并濾液濃縮，醇沉兩次，過(guò)濾，合并沉淀，將所得沉淀完全溶解于蒸餾水中，活性炭脫色，過(guò)濾，濾液中加入三氯乙酸脫蛋白后，將濾液透析處理，濃縮，冷凍干燥至粉末，稱重后于-20℃保存，用時(shí)蒸

2、餾水溶解。通過(guò)培養(yǎng)Raw264.7細(xì)胞株，分離培養(yǎng)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞和小鼠脾臟細(xì)胞，用RT-PCR方法測(cè)定并篩選出適合的給藥劑量和給藥時(shí)間，在給藥劑量和給藥時(shí)間一定的條件下，用RT-PCR方法測(cè)定樺褐孔菌多糖對(duì)細(xì)胞因子IL-6、IL-1β、TNF-α的mRNA表達(dá)的影響，所得電泳結(jié)果圖用ImageJ2x軟件進(jìn)行灰度分析比較，并用SPSS19軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，再收集48 h的Raw264.7細(xì)胞株上清液進(jìn)行ELISA檢測(cè)，得標(biāo)準(zhǔn)曲線后計(jì)算

3、所分泌的細(xì)胞因子TNF-α和IL-1β的濃度，并用SPSS19軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果：從1965.98 g樺褐孔菌原藥材中，提取得到10.28 g的多糖，采用外標(biāo)法，測(cè)得樺褐孔菌多糖含量為41.83g/mL（836.6 mg/g）。通過(guò)檢測(cè)樺褐孔菌多糖對(duì)LPS刺激后的Raw264.7細(xì)胞株促炎細(xì)胞因子IL-6的mRNA表達(dá)抑制，得出40μg/mL作用6 h為樺褐孔菌多糖的最佳給藥濃度和給藥時(shí)間。樺褐孔菌多糖（40μg/mL

4、）對(duì)LPS或PMA刺激6 h后的Raw264.7細(xì)胞株、小鼠腹腔巨噬細(xì)胞和小鼠脾臟細(xì)胞促炎細(xì)胞因子TNF-α、IL-1β的mRNA表達(dá)均有明顯抑制（P<0.05）。樺褐孔菌多糖（40μg/mL）對(duì)LPS刺激48 h后的Raw264.7細(xì)胞株促炎細(xì)胞因子TNF-α、IL-1β的分泌均有明顯抑制（P<0.05）
　　結(jié)論：
　　1.通過(guò)浸提、醇沉、透析、冷凍干燥等技術(shù)，可從樺褐孔菌原藥材中獲得樺褐孔菌多糖。
　　2.40μ

5、g/mL樺褐孔菌多糖作用6 h，對(duì)LPS刺激后的Raw264.7細(xì)胞株促炎細(xì)胞因子IL-6的mRNA表達(dá)有明顯的抑制作用。
　　3.40μg/mL樺褐孔菌多糖作用6 h，對(duì)LPS或PMA刺激后的Raw264.7細(xì)胞株、小鼠腹腔巨噬細(xì)胞和小鼠脾臟細(xì)胞促炎細(xì)胞因子TNF-α、IL-1β的mRNA表達(dá)均有明顯的抑制作用。
　　4.40μg/mL樺褐孔菌多糖作用48 h，對(duì)LPS刺激后的Raw264.7細(xì)胞株促炎細(xì)胞因子TNF-α、