農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將轉(zhuǎn)錄因子ABP9轉(zhuǎn)化大豆及遺傳轉(zhuǎn)化條件優(yōu)化研究.pdf

1、大豆是重要的油料作物和飼料作物，也是人類的主要食用蛋白和工業(yè)原料的來(lái)源。近些年隨著我國(guó)水土資源的嚴(yán)重流失，土地荒漠化不斷擴(kuò)大，大豆的生產(chǎn)受干旱、鹽害等不利因素的影響，產(chǎn)量很不穩(wěn)定，產(chǎn)品已遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能自給。因此，通過(guò)基因工程手段提高大豆抗逆性，在理論和生產(chǎn)上具有重要意義。 已有研究從玉米中鑒定了過(guò)氧化氫酶CATI基因啟動(dòng)子應(yīng)答ABA信號(hào)的順式元件ABRE，克隆了與之特異性結(jié)合的轉(zhuǎn)錄因子ABP9基因；將ABP9克隆到質(zhì)粒中構(gòu)建了植物組成

2、型表達(dá)載體pCRl20-35S-ABP9，并證明了ABP9的表達(dá)可以提高植物對(duì)干旱、鹽害等產(chǎn)生的氧化逆境的抗性。 本研究利用含有表達(dá)載體pCR120-35S-ABP9的農(nóng)桿菌EHA105，以大豆子葉節(jié)為外植體，用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化大豆，以期獲得抗逆性提高的轉(zhuǎn)基因大豆；同時(shí)對(duì)農(nóng)桿菌介導(dǎo)的大豆遺傳轉(zhuǎn)化系統(tǒng)條件進(jìn)行優(yōu)化，為提高大豆遺傳轉(zhuǎn)化效率提供依據(jù)。研究發(fā)現(xiàn)，合豐25、黑農(nóng)35、爭(zhēng)光1號(hào)等品種再生能力較強(qiáng)；升汞滅菌法對(duì)種子的傷害大于氯

3、氣薰蒸滅菌法；培養(yǎng)基中加入L-半胱氨酸可提高抗性叢生芽獲得率，并在各培養(yǎng)階段沒(méi)有共同促進(jìn)和累積抑制作用；外植體對(duì)光照和氧氣條件很敏感，并且對(duì)氧氣的敏感程度要大于光照；植物激素對(duì)叢生芽伸長(zhǎng)影響的重要性依次為ZT、GA<,3>、IAA和6-BA，最優(yōu)濃度配比為：6-BA 1.5mg/L，GA<,3>0.75mg/L，IAA 0.1mg/L，ZT 1.0mg/L；利用優(yōu)化后的轉(zhuǎn)化條件，共獲得8株轉(zhuǎn)基因再生植株，經(jīng)PCR檢測(cè)和序列分析，4株為陽(yáng)