血小板衍生膜微粒促血管生成的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：應(yīng)用血小板衍生膜微粒(PMPs)，通過(guò)體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)研究其對(duì)血管生成的影響，為臨床如何促進(jìn)組織損傷的修復(fù)提供理論支持。如果能有效促進(jìn)血管功能的恢復(fù)，將有重要的臨床意義。 方法：用凝血酶激活血小板釋放出PMPs，再經(jīng)高速離心分離出PMPs，用流式細(xì)胞儀(FCM)檢定PMPs，并用BCA法測(cè)定PMPs的蛋白含量；采用噻唑藍(lán)(MTT)實(shí)驗(yàn)和FCM，觀察不同濃度的PMPs對(duì)建株人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞ECV304增殖和凋亡的影響；將PMPs接

2、種于雞胚絨毛尿囊膜(CAM)上，觀察PMPs對(duì)CAM血管生成的影響。 結(jié)果：1.0U/ml凝血酶激活血小板后的PMPs釋放率為50.1％，經(jīng)高速離心后得到的PMPs純度大于99％。ECV304細(xì)胞的增殖與PMPs呈劑量依賴關(guān)系，在培養(yǎng)液中添加40μg/ml PMPs時(shí)，ECV304細(xì)胞增殖是空白對(duì)照組的1.8±0.3倍，與10μl/ml血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)組(增殖是空白對(duì)照組的1.9±0.5倍)相比，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，(

3、p>0.05)；PMPs能抑制ECV304細(xì)胞的凋亡，40μg/ml PMPs組的細(xì)胞凋亡率為(3.9±0.4)％，明顯低于空白對(duì)照組的細(xì)胞凋亡率(9.4±0.5)％，p<0.05。VEGF(10μl/ml)對(duì)ECV304細(xì)胞的凋亡無(wú)明顯抑制作用，其凋亡率為(8.0±0.8)％。當(dāng)將80μg/ml PMPs接種于CAM上，孵育72小時(shí)后，混合纖維素濾膜周圍可見(jiàn)到放射狀密集生長(zhǎng)的血管網(wǎng)，血管分支數(shù)為112.5±11.31，血管面積為6.1