促血管生成活性肝素衍生物的研究.pdf

1、目的和背景：利用促血管生成因子可以有效治療缺血性疾病，但存在不少問題，如這些昂貴的生長因子體內(nèi)半衰期短，使用劑量大，而且全身給藥還有誘發(fā)腫瘤的危險(xiǎn)。實(shí)際上，機(jī)體組織在缺血缺氧時(shí)，局部能分泌和表達(dá)促血管生長因子，肝素與之有高親和性，可以提高它們的穩(wěn)定性，并且是這些生長因子發(fā)揮作用所必需的。據(jù)此，本課題擬以肝素為母體，研制新型衍生物，專一用于促血管生成，為缺血性疾病的治療提供一種新藥。 方法：采用有機(jī)溶劑分級沉淀法、過氧化氫降解法獲

2、得不同分子量的肝素衍生物，并分別對其進(jìn)行多硫酸化、脫硫酸化修飾，測定這些衍生物的有機(jī)硫酸根含量、抗凝效價(jià)，并用高效液相色譜法對肝素衍生物的平均分子量進(jìn)行了測定。利用小鼠心肌缺血模型檢測制備的肝素衍生物促血管生成活性，通過免疫組化方法考察小鼠缺血心肌酸性成纖維細(xì)胞生長因子(acidicfibroblastgrowthfactor，aFGF)、血管內(nèi)皮生長因子(vascularendothelialgrowthfactor，VEGF)促血管

3、生長因子的表達(dá)情況；利用復(fù)合染色方法檢測aFGF、VEGF在小鼠缺血心肌的表達(dá)及外源性肝素衍生物在小鼠缺血心肌的分布情況，并考察篩選得到的兩種肝素衍生物對雞胚絨毛尿囊膜(chickenchorioallantoicmembrane，CAM)血管生成和對深Ⅱ度燒傷小鼠創(chuàng)面愈合的影響。利用紅外光譜法和核磁共振法對具有促血管生成活性的肝素衍生物進(jìn)行結(jié)構(gòu)測定。 結(jié)果：制備了8種不同分子量和硫酸化程度的肝素衍生物，利用小鼠心肌缺血模型篩選

4、出具有較高促血管生成活性的肝素衍生物—高分子量肝素多硫酸化衍生物和中分子量肝素多硫酸化衍生物，免疫組化結(jié)果顯示，在小鼠缺血心肌有aFGF和VEGF的表達(dá)，并且復(fù)合染色結(jié)果顯示，肝素衍生物與aFGF、VEGF可以同時(shí)出現(xiàn)在小鼠缺血心肌。CAM法研究表明，該肝素衍生物對血管生成具有一定的促進(jìn)作用。在小鼠深Ⅱ度燒傷創(chuàng)面愈合的實(shí)驗(yàn)中也證明，該肝素衍生物能夠促進(jìn)燒傷創(chuàng)面的愈合，縮短創(chuàng)面愈合時(shí)間。紅外掃描圖譜和13C-NMR圖譜說明對肝素衍生物的多