丙戊酸鈉對燙傷休克大鼠生命維持作用與機(jī)制研究.pdf

1、目的:1.建立50％TBSAⅢ°燙傷休克大鼠實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ停?.研究組蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制劑丙戊酸鈉(VPA)對燙傷休克大鼠生存時(shí)間和臟器功能的影響；3.研究HDAC抑制劑的作用機(jī)制:著重研究其對大鼠心肌HDAC1、熱休克蛋白70(HSP70)表達(dá)的影響。
　　 方法:1.燙傷休克模型制作雄性SD大鼠,體重220～250g,氯胺酮+速眠新Ⅱ麻醉后,大鼠頸、背部、腹部及雙下肢備皮,后水浴燙傷,水溫80℃,背部15秒、雙下肢15

2、秒、腹部8秒,造成50％TBSAⅢ度燙傷。后無菌術(shù)消毒皮膚,右側(cè)頸總動脈置人心功能監(jiān)護(hù)儀感應(yīng)導(dǎo)管,監(jiān)測大鼠平均動脈壓變化。2.實(shí)驗(yàn)分組與處理120只雄性SD大鼠,隨機(jī)分為:①假燙組、②燙傷組、③燙傷+2M2P組、④燙傷+VPA組。③④組于燙傷后即刻皮下注射2M2P(300mg/kg)、VPA(300mg/kg)。各組大鼠分別于燙傷后2h、6h及12h,腹主動脈取血；后處死大鼠,胸正中線剖開取心,標(biāo)號凍存?zhèn)溆?。對②③④組取血前死亡大鼠,記

3、錄生存時(shí)間,納人生存分析。3.指標(biāo)檢測與方法腹主動脈采血后,全自動生化分析儀測定血漿CK-MB、ALT及Cr指標(biāo)變化,ELISA試劑盒檢測大鼠血清HSP70含量。HE染色觀察大鼠心肌組織病理變化；Western blot檢測大鼠心肌組織HDAC1.表達(dá)；免疫組織化學(xué)法檢測大鼠心肌細(xì)胞中HSP70表達(dá)。
　　 結(jié)果:1.燙傷休克表現(xiàn)大鼠燙傷面積均在50％左右,背部、腹部及雙下肢燙傷部位皮革狀、創(chuàng)面發(fā)白、松弛,隨后出現(xiàn)潰瘍或結(jié)痂現(xiàn)象

4、,均達(dá)到Ⅲ°燙傷。燙傷后2h,大鼠平均動脈壓迅速下降至50mmHg左右,維持約4小時(shí)左右,于燙傷后6h左右,平均動脈壓再次快速下降,隨后多數(shù)大鼠死亡。2.生存時(shí)間燙傷后大鼠生存時(shí)間:燙傷組349.5±17.9min,12h生存率為0；2M2P組521.5±32.6min,12h生存率約為20％,可一定程度延長燙傷休克大鼠生存期；VPA組為700.0±66.17min,12h生存率約為60％,可明顯延長燙傷休克大鼠生存時(shí)間(P<0.01,

5、Kaplan-meier生存分析)。3.臟器功能與假燙組相比,燙傷組(②組)、2M2P組(③組)大鼠血漿CK-MB、Cr、ALT水平持續(xù)升高,②③組間無差異；與同時(shí)間點(diǎn)②③組相比,VPA組(④組)血漿CK-MB、Cr水平顯著改善,血漿ALT水平趨勢上低于②③組,但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。4.心肌組織病理學(xué)變化病理切片觀察顯示:隨時(shí)間變化,燙傷后大鼠心肌損傷逐漸加重；相同時(shí)間點(diǎn),④組大鼠心肌損害較②③組損傷較輕；隨時(shí)間變化,④組大鼠心肌損害雖進(jìn)行性

6、加重,但病理變化相對遲緩,損傷出現(xiàn)時(shí)間晚于②③組大鼠。5.心肌HDAC1表達(dá)Western Blot檢測顯示:VPA組大鼠心肌HDAC1表達(dá)明顯低于燙傷組與2M2P組；2M2P組心肌HDAC1.表達(dá)低于燙傷組。6.心肌、血清HSP70變化免疫組化顯示:與假燙組相比,燙傷組心肌HSP70表達(dá)略有增加；2M2P組HSP70表達(dá)總體趨勢上高于燙傷組,但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；VPA組HSP70表達(dá)明顯高于燙傷組與2M2P組。ELISA顯示:與假燙組相比

7、,燙傷組、2M2P組與VPA組大鼠血清HSP70含量持續(xù)上升,至6h達(dá)到高峰,三組變化基本一致,組間無差異。
　　 結(jié)論:1.VPA顯著延長燙傷休克大鼠生存時(shí)間,提高燙傷休克大鼠12h存活率,顯著改善臟器功能,減輕心肌病理損傷。2.2M2P、VPA對HDAC1均有一定的抑制作用,VPA的抑制作用強(qiáng)于2M2P。此外,VPA尚能使大鼠心肌HSP70表達(dá)增加。3.VPA的作用機(jī)制可能與其抑制HDAC活性,影響組蛋白乙?；?促進(jìn)保護(hù)