丙戊酸鈉對(duì)PD細(xì)胞模型的保護(hù)作用研究.pdf

1、帕金森病(Parkinson’s disease, PD)是一種常見的進(jìn)展緩慢的神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病,到目前為止,PD還不能完全治愈,探尋該病更好的治療策略是亟待解決的難題。丙戊酸鈉(valproate, VPA),在臨床上用于治療雙相精神障礙和癲癇,也可用于緩解神經(jīng)退行性疾病的癥狀;現(xiàn)有研究表明,VPA在體內(nèi)外都具有神經(jīng)保護(hù)和神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)作用,促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞軸突生長(zhǎng),抑制神經(jīng)細(xì)胞凋亡。成束和延伸蛋白(fasciculation and elo

2、ngation proteinzeta1, FEZ1)在神經(jīng)細(xì)胞發(fā)育、胞內(nèi)運(yùn)輸、細(xì)胞凋亡和神經(jīng)遞質(zhì)的釋放中起到重要的作用,參與中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育及軸突的生長(zhǎng)和成束。腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤 PC12,可以合成分泌多巴胺,是多巴胺能神經(jīng)元體外培養(yǎng)的細(xì)胞模型,常被用來建立體外PD細(xì)胞模型。
　　目的：研究VPA對(duì)PC12細(xì)胞增殖、遷移及對(duì)FEZ1表達(dá)的影響;建立PD細(xì)胞模型,探討VPA對(duì)6-OHDA誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞損傷的神經(jīng)保護(hù)和抗氧化作用。

3、
　　方法：⑴采用0.5、0.75、1.0 mM的VPA分別處理PC12細(xì)胞24 h,觀察細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化和細(xì)胞遷移作用的影響,以MTT法檢測(cè)VPA對(duì)細(xì)胞增殖作用的影響,采用real-time PCR與Western blot檢測(cè)FEZ1的表達(dá)變化。⑵建立PD細(xì)胞模型,將細(xì)胞分組:正常對(duì)照組、6-OHDA組、VPA(0.5、0.75、1.0 mM)+6-OHDA組;觀察各組細(xì)胞的動(dòng)態(tài)變化,以MTT法檢測(cè)各組細(xì)胞的增殖情況,采用re

4、al-time PCR與Western blot檢測(cè)FEZ1及凋亡相關(guān)基因的表達(dá)變化,檢測(cè)各組細(xì)胞的SOD活性和MDA含量。
　　結(jié)果：①M(fèi)TT及細(xì)胞劃痕結(jié)果顯示,VPA能促進(jìn)PC12細(xì)胞增殖與遷移,并呈劑量依賴性;real-time PCR與Western blot結(jié)果顯示,VPA能促進(jìn)FEZ1 mRNA和蛋白的表達(dá),并呈劑量依賴性。②用6-OHDA處理PC12細(xì)胞制備PD細(xì)胞模型,PC12細(xì)胞增殖受到抑制;而用VPA預(yù)處理24

5、h后,再以6-OHDA處理24h,細(xì)胞凋亡狀況有所緩解,細(xì)胞皺縮數(shù)量降低,突起伸長(zhǎng),相互接觸的細(xì)胞數(shù)量增多。real-time PCR與Western blot檢測(cè)各處理組FEZ1、Bcl-2和Bax的表達(dá)結(jié)果顯示:6-OHDA組與正常對(duì)照組相比,FEZ1和Bcl-2表達(dá)下降,Bax表達(dá)上升;VPA+6-OHDA組與6-OHDA組相比,FEZ1和Bcl-2表達(dá)上升,Bax表達(dá)下降。SOD活性和MDA含量的檢測(cè)結(jié)果顯示:6-OHDA組與正