腺苷A-,2A-受體與空間學(xué)習(xí)記憶的關(guān)系及調(diào)節(jié)機(jī)制的研究.pdf

1、目的：本研究采用藥物干預(yù)和基因敲除兩種手段探討腺苷A<,2A>受體對(duì)小鼠空間學(xué)習(xí)記憶過程的影響,通過測(cè)定不同腦區(qū)的cAMP應(yīng)答元件結(jié)合蛋白(CREB)的表達(dá),尋找其可能的調(diào)節(jié)機(jī)制. 方法：(1)實(shí)驗(yàn)分組:①藥物干預(yù)(包括腺苷受體非特異性拮抗劑咖啡因和特異性拮抗劑DPCPX、SCH58261):選用清潔級(jí)C57BL/6J雄性小鼠73只,隨機(jī)分成5組:第1組為腺苷受體非特異性拮抗劑咖啡因低劑量組(n=15),腹腔注射咖啡因(10mg

2、/kg);第2組為咖啡因高劑量組(n=15),腹腔注射咖啡因(50mg/kg);第3組為腺苷A1受體特異性拮抗劑組(n=10),腹腔注射DPCPX(5mg/kg);第4組為腺苷A2A受體特異性拮抗劑組(n=10),腹腔注射SCt{58261(5mg/kg);第5組為對(duì)照組(n=23),腹腔注射等量的生理鹽水.每天給藥一次,行為學(xué)訓(xùn)練結(jié)束后立即給藥.②基因敲除:選用腺苷A<,2A>受體基因敲除小鼠模型(A2ARKO組,n=8)和同窩野生型

3、小鼠(WT組,n=8). (2)觀察指標(biāo):①行為學(xué)檢測(cè)方法:采用Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)方法和八臂迷宮實(shí)驗(yàn)方法分別檢測(cè)其空間參考記憶和工作記憶能力.②分子生物學(xué)指標(biāo):采用免疫印跡(Western Blot)實(shí)驗(yàn)方法測(cè)定各組小鼠不同腦區(qū)海馬和紋狀體CREB蛋白的表達(dá)量. 結(jié)果： (1)行為學(xué)檢測(cè)結(jié)果:①腺苷受體非特異性拮抗劑咖啡因小劑量(10mg/kg)組與高劑量(50mg/kg)組及對(duì)照組相比Morris水迷宮的定

4、位航行試驗(yàn)的逃避潛伏期顯著縮短,空間搜索試驗(yàn)穿越原平臺(tái)位置的次數(shù)顯著增多.②腺苷A<,1>受體特異性的拮抗劑DPCPX和A<,2A>受體特異性的拮抗劑SCH58261對(duì)小鼠Morris水迷宮的定位航行試驗(yàn)的潛伏期和空間探索能力無明顯影響.③腺苷A<,2A>受體基因敲除小鼠在Morris水迷宮重復(fù)獲得試驗(yàn)中工作記憶成績顯著優(yōu)于野生型,在8-臂迷宮訓(xùn)練中工作記憶錯(cuò)誤數(shù)顯著少于野生型;而Morris水迷宮定位航行和空間探索試驗(yàn)成績無顯著性差異

5、;8-臂迷宮訓(xùn)練中空間參考記憶錯(cuò)誤數(shù)兩組沒有顯著性差異. (2)Western Blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果:①腺苷受體非特異性拮抗劑咖啡因小劑量(10mg/kg)組海馬組織CREB表達(dá)量明顯高于咖啡因高劑量(50mg/kg)組及對(duì)照組,而不同劑量咖啡因?qū)y狀體組織的CREB表達(dá)量的影響與對(duì)照組相比無顯著性差異;②腺苷A<,1>受體拮抗劑DPCPX和A<,2A>受體拮抗劑SCH58261對(duì)小鼠海馬及紋狀體組織表達(dá)CKEB量的影響無明顯差異;

6、③腺苷A<,2A>R基因敲除小鼠海馬及紋狀體組織的CREB表達(dá)量與野生型組相比無明顯差異. (3)結(jié)果提示:①腺苷受體非特異性拮抗劑咖啡因小劑量能夠提高小鼠的空間學(xué)習(xí)記憶能力,增加有關(guān)腦區(qū)記憶相關(guān)蛋白CREB的合成,而高劑量咖啡因?qū)臻g學(xué)習(xí)記憶無明顯影響;②腺苷A<,1>和A<,2A>受體特異性拮抗劑對(duì)空間學(xué)習(xí)記憶影響無明顯影響;③而腺苷A<,2A>R基因敲除小鼠表現(xiàn)為空間工作記憶增強(qiáng),腦內(nèi)記憶相關(guān)蛋白CREB的合成無變化.

7、 結(jié)論： ①基因敲除腺苷A<,2A>受體顯著增強(qiáng)空間工作記憶,對(duì)空間學(xué)習(xí)記憶的也有調(diào)節(jié),它對(duì)空間工作記憶的影響更為顯著;可見腦內(nèi)腺苷作用于A<,2A>受體參于小鼠的空間記憶(特別是空間工作記憶)的調(diào)節(jié). ②腺苷受體非特異性受體拮抗劑咖啡因小劑量能夠提高小鼠的空間學(xué)習(xí)記憶能力,同時(shí)增加有關(guān)腦區(qū)記憶相關(guān)蛋白CREB的合成,但高劑量咖啡因?qū)臻g學(xué)習(xí)記憶無明顯影響;因?yàn)槟X腺苷A<,2A>受體是小劑量(但不是高劑量)咖啡因的主